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  • 發布時間:2019-03-28 22:42 原文鏈接: 細胞破碎和蛋白質溶解實驗_?高壓勻漿法

    實驗方法原理細胞懸液從高壓室的環狀隙高速噴射到靜止的撞擊環上,被迫改變方向經出口管流出。此過程中細胞經歷了高速造成的剪切、碰撞及高壓到常壓的變化,從而破碎釋放內含物。增加壓力或增加破碎次數都能提高破碎效率,但壓力增加到一定程度零部件磨損較大。通常撞擊環較易磨損應定期更換。為防止污染,使用前后高壓室至出口管需徹底清潔。
    實驗材料

    細菌或酵母

    試劑、試劑盒

    裂解緩沖液

    儀器、耗材

    高壓勻漿器

    實驗步驟

    1. 用裂解緩沖液混懸清洗過的細胞。通常細胞濕重(g )與緩沖液體積(ml)之比的范圍是 1/1 到 1/4;


    2. 加樣品液進入高壓室,并提升壓力至預定值(一般 0.55×108~1.38×108 Pa);


    3. 維持上述壓力,調整出口流速為每分鐘 2~3 ml(約每秒 1 滴)。

    注意事項

    1. 該法常用來裂解細菌和酵母。


    2. 適用于中等體積(10~30 ml)的樣品,體積太大或太小均不適宜。


    3. 為獲得樣品最佳破碎效果,樣品可以第二次甚至第三次通過高壓勻漿。


    4. 溫度敏感物質有必要低溫操作。多次實施時,每次樣品要冷。

    展開


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