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  • 發布時間:2022-09-02 13:45 原文鏈接: 細胞融合的融合方法有哪些?

    同種細胞在培養時2個靠在一起的細胞自發合并,稱自發融合;異種間的細胞必須經誘導劑處理才能融合,稱誘發融合。

    仙臺病毒法融合

    ①兩種細胞在一起培養,加入病毒,在4℃條件下病毒附著在細胞

    膜上。并使兩細胞相互凝聚;

    ②在37℃中,病毒與細胞膜發生反應,細胞膜受到破環,此時需

    要Ca2+和Mg2+,最適PH為8.0一8.2;

    ③細胞膜連接部穿通,周邊連接部修復,此時需Ca2+和ATP;

    ④融合成巨大細胞,仍需ATP。

    聚乙二醇(PEG)法

    聚乙二醇(PEG)結構為:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子量大于200小于6000者均可用作細胞融合劑。PEG經高壓滅菌后,與溫熱的Engle氏液混合。一般選用分子量為4,000,常用濃度為50%,pH8.0~pH8.2(用10%NaHCO3調整),分子量小的PEG,融合效應差,又有毒性,分子量過大,則粘性太大,不易操作。

    電融合法

    在直流電脈沖的誘導下,細胞膜表面的氧化還原電位發生改變,使異種細胞粘合并發生質膜瞬間破裂,進而質膜開始連接,直到閉和成完整的膜,形成融合體。

    優點:融合率高、重復性強、對細胞傷害小;

    裝置精巧、方法簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程;

    免去PEG誘導后的洗滌過程、誘導過程可控性強。

    離心振動

    物理方法之一,使用離心機等機器實現細胞之間的融合。


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