(三)MTT法測細胞相對數和相對活力
活細胞中的琥珀酸脫氫酶可使 MTT分解產生蘭色結晶狀甲贊顆粒積于細胞內和細胞周圍。其量與細胞數呈正比,也與細胞活力呈正比。
l、細胞懸液以 1000rpm離心 10分鐘,棄上清液。
2、沉淀加入 0.5-1ml MTT,吹打成懸液。
3、37℃下保溫 2小時。
4、加入 4—5 ml酸化異丙醇(定容)。打勻。
5、1000 rpm離心,取上清液酶標儀或分光光度計 570nm比色,酸化異丙醇調零點。
注意:MTT法只能測定細胞相對數和相對活力,不能測定細胞絕對數。
附:
1、0.4%臺盼蘭染液配制:
臺盼蘭 0.4克 加雙蒸水至 100 ml。Cbeqe
2、MTT配制:
MTT 0.5克,溶于 100 ml的磷酸緩沖液或無酚紅的基礎液中。4℃下保存。
3、酸化異丙醇配制:
異丙醇中加入 HCl使最終達 0.04mol/L。