| 實驗材料 | 成年大鼠的小腦皮質 大鼠經腹腔內注射戊巴比妥鈉麻醉后取出小腦 |
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| 試劑、試劑盒 | Kamovsky固定液 多聚甲醛 戊二醛 二甲砷酸鈉 |
| 實驗步驟 |
一、固定
1.用 Kamovsky 固定液灌注。Kamovsky 固定液配方如下（以 100 ml 固定液的量計)：
A 液：2 g 多聚甲醛溶于 60℃ 的 40 ml 水中，將 2~6 滴 1mol/L 的 NaOH 慢慢滴入直到溶液變清亮。
使用前將兩種液體貯存于 4L，使用時再混合為 100 ml 固定液。不同灌注方法的詳細步驟也不相同，這里所采用的灌注法既簡單又可靠，它能最大限度地減少開始麻醉和有效固定之間的時間。蠕動加壓泵（Watson-MarlowMHRE200) 為灌注提供動力（也有許多作者用靜水壓作為動力)，插管完畢后立即導入固定液。起初灌注液保持相對低的流速，出現固定液起效的征兆（四肢和尾巴伸展）后的短時間內應逐漸増加流速。固定過程持續大約 10 min，固定 1 只成年大鼠需要 500 ml 固定液。不需要額外地監測灌流時的壓力。
插管用 21 G 皮下注射針制成，在中點處折彎，尖端磨平。將一滴環氧樹脂滴于針尖的一側，然后把它涂抹在針尖周圍，以利于導管經左心室尖的切口插入升主動脈。插管后用動脈鉗將插管和心臟夾在一起并置于適當的位置。在手術和插管過程中，蠕動加壓泵應保持低速持續運轉，以防止氣泡進入血管。當插管固定于適當的位置后，立刻剪開右心房，同時加快泵轉動的速度，導入固定液開始固定。
2.灌注完畢后，取出大腦并置于新鮮的固定液中。組織塊或組織片應切得足夠薄 (不超過 1 mm), 以利于四氧化鋨滲透。四氧化鋨后固定、脫水及包埋的步驟與上面例 1 所述相同。
二、切片
1.切片厚 1 um，甲苯胺藍和派羅寧染色后用于初步觀察和調整，方法同例 1。
2.用超薄切片機切取約 70~90nm 厚（呈銀白-淡金黃色）的切片，將切片收集于涂有聚乙烯醇的銅網上，干燥后用枸櫞酸鉛和醋酸鈾染色。
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| 其他 |
結果
有人曾描述過小腦皮質內幾種不同的突觸類型，其中的大多數突觸屬于軸-樹突觸。我們在此僅簡要地舉三個例子：一個來自于分子層，另外兩個來自于顆粒層內的突觸小球。就突觸而言，分子層內主要是顆粒細胞的平行纖維與
Purkinje 細胞的樹突棘形成的突觸聯系。圖 1-4A
所示為分子層最外層的水平切面，含有橫切的平行纖維（pf)。可見幾個由平行纖維與樹突棘形成的突觸（s)，注意這些突觸常與膠質細胞的突起形成緊密聯系，而平行纖維（顆粒細胞的軸突）聚集在一起且缺乏膠質細胞形成的單個髓鞘。圖
1-4B 是一個相同類型突觸的放大像，它屬于 Grayl
型突觸，特別應該注意的是突觸后膜增厚以及在突觸前、后膜間有一薄層細胞外基質。突觸前囊泡為圓形（rv)。圖 1-4C
所示顆粒層內的一個突觸小球，它是由一個位居中央的苔蘚纖維（mf) 的玫瑰花瓣狀終扣和周圍的許多顆粒細胞的樹突（gcd) 以及 Golgi
細胞的軸突形成的復雜結構。苔蘚纖維和 Golgi 細胞軸突都與顆粒細胞的樹突形成軸-樹突觸，但它們分別屬于 Gray1 型和 Gray2
型突觸。圖 1-4D 凊楚地顯示 Gdgi 細胞與顆粒細胞間的突觸。突觸后膜增厚遠不如 Grayl
型突觸明顯，且突觸前、后膜之間無明顯的細胞外基質。許多突觸前囊泡都屬于扁平囊泡。以往的研究已經揭示平行纖維和苔蘚纖維是興奮性的，而 Golgi
細胞是抑制性的。
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