1. 細胞培養
用支持物細胞培養法，把細胞培養在小蓋片上；
2. 漂洗
用鑷子挾出小蓋片，在溫PBS中漂洗3 次，每次30 秒；
3. 固定
在室溫中用PBS配的3 %甲醛液固定20 分鐘；
4. 漂洗
從固定液中取出，仍用溫PBS漂洗3 次，每次1 分鐘，最后在濾紙上吸干多余的PBS；
5. 過丙酮
投入冷丙酮中（－10 ℃～－20 ℃），令細胞面向上，作用7 分鐘；
6. 漂洗：
同4；
7. 抗體處理
取一直徑6 厘米干凈的碟皿，向皿中央滴1 滴濃度為0.1～0.2 mg/ml的一級抗管蛋白抗體，令小蓋片細胞面向下扣在抗體液上，覆以皿蓋，置37 ℃溫箱中45 分至1 小時（內有水盒以避免抗體液蒸發干掉）；
8. 漂洗
向碟皿內徐徐滴加PBS，令蓋片浮起在液面，用鑷子挾出，按4處理；
9. 二級熒光抗體處理
按7進行（熒光抗體常用羊抗兔抗體）；
10. 漂洗
按8和4處理，封片；取一大載物片，用濾紙剪一紙框置于載物片上向紙框中滴甘油/PBS（pH8.5，PBS 1 分加甘油9 分）少許，把小蓋片置入框中再覆以大蓋片；置熒光顯微鏡下觀察。
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