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  • 發布時間:2020-08-10 16:20 原文鏈接: 細菌培養實驗

    一、需氧培養法:本法是臨床細菌室最常用的培養方法,適合一般需氧和兼性厭氧菌的培養。需氧培養的常用溫度為 35-37℃,這適合于絕大多數致病菌的生長。此外,還有用 4℃ 培養,如李斯德菌除了能在 37℃ 中生長外。還能在 4℃ 中生長,而其他革蘭氏陽性菌則不能,故可用于鑒別。李斯德菌在 25℃ 培養時有動力,胎兒彎曲菌則可以在 25℃ 中生長。

    二、二氧化碳培養法:有些細菌如腦膜炎奈瑟氏菌,淋病奈瑟氏菌和布魯桿菌,初次從臨床標本中分離時,都需要有 5% 一 10% 的 CO。環境,這些菌才生長良好。通常需供給 COZ 的方法有:

    1、M 氧化碳培養箱:是一臺特制箱子,即能調節 CO2 的含量,又能調節所需的溫度(一般為 35-37℃),CO2 是用鋼瓶定期充有 99.99% 含量的 CO2,再將此鋼瓶與 CO2 培養箱的 CO2 運送管連接,鋼瓶上的真空表可以指示 CO2 輸出量,此法可供大型實驗室應用。

    2、燭缸法:將己接種好的平板或試管培養基,置入干燥器內,并放入點燃的蠟燭。干燥器蓋的邊緣涂上凡士林,蓋上蓋子,燭光經幾分鐘后自行熄滅,此時干燥器內的 CO2 含量約占 5-10%,再將放有培養物的干燥器置 37℃ 培養箱中培養。

    3、化學法:常用碳酸氫鈉鹽酸法。按每升容積稱取碳酸氫鈉 0.4 g,濃鹽酸 0.35 ml 的比例,分別置入容器內,將容器放入干燥器內,待放好培養物后,蓋緊干燥器的蓋子,傾斜容器使濃鹽酸與碳酸氫鈉接觸生成 CO2。

    三、厭氧培養法:本法適用于專性厭氧菌的培養。其方法有化學法、生物學方法以及綜合方法。常用的厭氧法有:

    l、庖肉培養基法:用馬肉或牛肉渣加適量肉湯制備而成,適用于所有厭氧菌特別是梭狀芽胞桿菌的培養。

    2、焦性沒食子酸:在一清潔的玻璃板上放置一塊消毒沙布,在沙布上加少量焦性沒食子酸和 KOH(NaOH)。立即蓋上己接種標本的平板培養基,平板四周用石蠟封住,阻止氧氣進人。待上述藥品起化學反應后,可吸收氧氣,造成厭氧環境。

    此法簡便,適用于一般實驗室,但該化學反應中產生的焦性沒食子堿,對細菌有一定毒性作用,故分離率不高。

    3、厭氧罐法:利用能密封的罐子,以物理或化學方法造成無氧環境。常用抽氣換氣法和冷觸媒法。前者抽出罐內空氣,充入氮氣,如此反復三次,最后充入 10%H2,10%CO2,80%N2 的混合氣體,并用鈀為觸媒,催化 O2 與 H2 化合成水,達到厭氧環境。罐內置美蘭指示液,有氧時美蘭呈蘭色,無氧時被還原為無色。后者在厭氧罐內放置產氣袋,袋內裝有硼氫化鉀,碳酸氫鈉和枸櫞酸制成的藥片,使用時剪開上角,加入 10 ml 水,立即蓋好罐蓋,扭緊固定卡,此時由氣袋內產生的 H2,在事先放人罐內的靶粒催化下,與同罐內的 O2 結合成水,10-30s 即見罐蓋和罐壁上出現水滴,罐內厭氧條件由液體美蘭指示劑指示。此法效果好,適用于大、中型實驗室。

    4、氣袋法:將接種好的平板培養基,置入特制的塑料氣袋中,并密封袋口,其厭氧原理同厭氧法的冷觸媒法。此法簡便,宜用于床邊接種和基層實驗室。


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