染色方法：
1．涂片經火焰固定，加結晶紫液染1 min，清水沖去染液。
2．加碘液染l min，水洗。
3．加脫色液，不時搖動約10～30s，至無紫色脫落為止，水洗。
4．加復染液，染30s，水洗。
5．干后鏡檢。
二、抗酸染色
抗酸染色直接用于痰標本時，可以適當增加標本涂片的厚度，以提高檢出率。染厚涂片時，須掌握復染色時間。如果背景過深，影響鏡檢。
奴卡菌及放線菌可呈弱抗酸性，取培養菌落涂片染色時，呈現兩種現象，視野中有些菌細胞陽性，另外一些則陰性；有時同一個菌體上，紅色的深淺亦有不同，觀察時應予注意。
抗酸染色有兩種常用方法：① 堿性復紅法又稱萋納(Ziehl—Neelsen)法。 ② 熒光染料金胺O法(也稱金胺O-羅丹明B法)。
堿性復紅染色法
試 劑
1．萋納石炭酸復紅溶液
堿性復紅乙醇飽和溶液 10ml
5％石炭酸溶液 90ml
2．脫色劑 *
濃鹽酸 3ml
95％乙醇 97ml
3．復染液(呂弗勒美藍液)
美藍乙醇飽和溶液 30ml
10％氫氧化鉀 0.1ml
蒸餾水 100ml
染色方法
1．涂片經火焰固定，加石炭酸復紅溶液，徐徐加熱至有蒸汽出現，切不可沸騰。染5 min(若染色奴卡菌需要加長時間)，水洗。
2．加脫色劑，不時搖動玻片至無紅色脫落為止，水洗。
3．加復染液，染0.5～l min，水洗。
4．干后鏡檢。分枝桿菌呈紅色，背景為藍色。
*：奴卡菌、放線菌標本染色時，脫色劑改用2％硫酸水溶液。
(二)金胺O-羅丹明B染色法
染 劑
1．羅丹明B液：羅丹明B 0.1g加蒸餾水100ml；
2．0.1％金胺O液：金胺O 0.1g加蒸餾水95ml，再加入純石炭酸5ml，混勻；
3．3％鹽酸酒精；
4．稀釋美藍液：呂弗勒美藍液10ml，加蒸餾水90ml，混勻。
方 法
涂片固定后加第1液30～90s。
棄去第1液后加第2液染15min。
用第3液脫色1～2min，水洗。
滴加第4液染30s，水洗，待干，熒光抗酸菌在暗背景中呈現金黃色熒光。
三、鞭毛染色
用于觀察菌體上有無鞭毛、鞭毛在菌體上的位置以及鞭毛的數量。在細菌鑒定中，特別是非發酵菌的鑒定中很重要。
鞭毛染色可以直接從平板上挑選菌落，或從斜面上刮菌苔涂片即可，但必須注意動作盡量輕，以免鞭毛從菌體上脫落。菌落應是
生長在營養較好的瓊脂平板(如血平板、營養瓊脂)上的過夜培養物。不可采用有抑制劑的選擇性培養基，如中國藍、麥康凱、SS瓊脂等。觀察鞭毛時，應耐心尋找整個涂片上的菌細胞，因為并不是涂片上每個細菌細胞上的鞭毛特性及數量都一樣，應以鞭毛數量最多的菌細胞為準。
鞭毛染色(改良Ryu法)
試劑
A液： 5％石炭酸 10ml
鞣酸 2g
飽和硫酸鋁鉀液 10ml
B液： 結晶紫酒精飽和液
應用液：A液10份，B液1份，混合，室溫存放。
染色方法
1．玻片的處理：要求用新的載玻片。用前須在95％酒精中浸泡24小時以上。用時從酒精中取出，以干凈紗布擦干后使用。
2．在玻片上滴蒸餾水兩滴。一張玻片上可同時制2個涂片。
3．用接種環挑取血平板上菌落少許，將細菌點在玻片上的蒸餾水滴的頂部。一般只需點一下，僅允許極少量細菌進入水滴，不可攪動，以免鞭毛脫落。
4．玻片置室溫自然干燥。
5．滴加染液于玻片上，染色。
6．約10～15min后，用蒸餾水緩慢沖去染液。沖洗時應避免使染液表面的金屬光澤液膜滯留在玻片上，影響鏡檢。
7．玻片自然干燥后，鏡檢時應從涂片的邊緣開始，逐漸移向中心。尋找細菌較少的視野，鞭毛容易觀察。細菌密集的地方，鞭毛被菌體擋住，不易觀察。
四、異染顆粒染色
用于白喉棒狀桿菌染色，異染顆粒可明顯地被顯示出來。
標本直接涂片或細菌涂片均可用改良阿伯特(Albert)法染色來觀察異染顆粒。
試 劑
甲液： 甲苯胺藍 0.15g
孔雀綠 0.2g
冰醋酸 1ml
95％乙醇 2ml
蒸餾水 100ml
將各染料先溶于乙醇，然后加入水與冰醋酸的混合液中，充分混勻。靜置24h后過濾備用。
乙液： 碘 2g
碘化鉀 3g
蒸餾水 300ml
先將碘化鉀加少許蒸餾水(約2m1)，充分振搖，待完全溶解，再加入碘，使完全溶解后，加蒸餾水至300ml。
染色方法
1. 涂片經火焰固定，加甲液，染3～ 5 min。水洗。
2．滴加乙液，染l min。水洗。