先干燥就是為了染色時標本不易脫落。
固定不僅能殺死細菌，改變細菌對染料的通透性，還能使細菌吸附在玻片上，保持原有的形態結構。
媒染其作用是增強染料與細菌的親和力，更好地加強染料與細胞的結合。常用的媒染劑是碘液。
脫色幫助染料從被染色的細胞中脫色。利用細菌對染料脫色的難易程度不同，而將細菌加以區分。革蘭陽性細菌不易被脫色劑脫色，而革蘭陰性細菌則易被脫色。
復染目的是使脫色的細菌重新染上另一種顏色，以便與未脫色菌進行比較。
