細菌標本形態學檢驗常用技術和方法:形態學檢查方法是細菌檢驗中極為重要的鑒定手段之一，它不僅有助于細菌的初步識別，同時也是決定進行生化反應鑒定的重要步驟。如痰中的抗酸桿菌、腦脊液中腦膜炎球菌、泌尿生殖道分泌物中的淋球菌等。通過形態學檢查得到初步的診斷。由于細菌體積小，無色透明， 因此利用光學顯微鏡直接檢查只能觀察到細菌的動力，對形態、大小、排列方式、染色特性及特殊結構的判定，還須借助于染色標本的觀察。要研究其細菌的超微結構，還需用電
形態學檢查方法是細菌檢驗中極為重要的鑒定手段之一，它不僅有助于細菌的初步識別，同時也是決定進行生化反應鑒定的重要步驟。如痰中的抗酸桿菌、腦脊液中腦膜炎球菌、泌尿生殖道分泌物中的淋球菌等。通過形態學檢查得到初步的診斷。由于細菌體積小，無色透明， 因此利用光學顯微鏡直接檢查只能觀察到細菌的動力，對形態、大小、排列方式、染色特性及特殊結構的判定，還須借助于染色標本的觀察。要研究其細菌的超微結構，還需用電子顯微鏡。
一、不染色標本檢查法
不染色標本的檢查用于觀察活菌狀態，常用以檢查細菌的動力或運動狀況。
1．濕片法：用接種環取細菌培養液兩環， 置于載玻片中央，輕輕覆以蓋玻片。菌液要適量，不可外溢，不可有氣泡。高倍鏡下觀察。
2．懸滴法：加一小滴菌液在蓋玻片中央，在另一凹玻片凹窩的周圍涂少量凡士林，將凹面向下，對準蓋玻片中央，蓋在凹玻片上，迅速翻轉玻片，用小鑷子輕壓，使蓋玻片與www.med126.com凹玻片粘緊，密封凹窩邊緣。高倍鏡下觀察。
3．毛細管法：本法適用于觀察厭氧菌動力。先將待檢菌接種在適宜的液體培養基中，經厭氧過夜培養后，以毛細管（長60～70nm ，管徑0．5 ～1．0nm ) 接觸培養物，使菌液進入毛細管中，用火焰封閉毛細管兩端，將毛細管固定在載玻片上，鏡檢。
二、染色標本檢查法
（一) 基本方法
細菌胞漿無色透明，不易識別。常用適宜的染料使細菌著色后，以觀察其形態和特殊構造，且可按染色反應進行分類。
1．原理
（1) 物理吸附作用：由于毛細管現象和滲透作用， 使染料進入細胞內被溶解吸收。此外，細菌等電點較低，pH值2 ～5，在一般情況下細菌帶負電荷，易和帶正電荷的堿性染料相結合。
（2) 化學反應：菌體內某些化合物和染料相結合，發生化學反應使細菌著色，而且不易被脫色劑所脫色。
（3) 其他因素：細胞膜的通透性、膜孔的大小、細胞結構完整與否以及培養基成分，染色液中電解質含量、pH值、菌齡等都是影響細菌著色的因素。
2．方法
（1) 涂片：臨床標本大多可直接涂抹在潔凈的載玻片上。若是細菌的液體培養物，可直接加一小滴在載玻片，稍加涂布。若是從固體培養基上取細菌菌落，則應先用接種環取一環生理鹽水置于玻片上，然后從培養基上取少許菌在鹽水中輕輕磨勻，使呈輕微乳白渾濁，再涂布擴大至直徑20 mm 大小的圓形，待自然干燥，也可加微熱使其干燥。
（2) 固定：涂片干燥后，在火焰上迅速通過3 次加以固定。固定過程可殺死細菌，凝固細胞質和其他細胞結構，增加細菌細胞對染液的通透性，還可使細菌涂膜牢固，不被在染色過程中的流水沖洗脫落。
（3) 染色：一般用低濃度染色液（1％以下)，滴加染液覆蓋涂膜。分單染法和復染法。為促使染料與菌體結合，有的染色法可在染液中加入酚、明礬，有的在染色過程中加碘液，可起到媒染的作用，也有用加熱法促進著色的。
（4) 脫色：一般應用乙醇、丙酮或酸類作為脫色劑。適當掌握脫色時間以獲良好的效果。脫色劑可以顯示出細菌與染料結合的牢固程度，具有鑒別染色的作用。
（5) 復染：復染液應與初染液的顏色不同，以形成鮮明對比。復染可使已脫色的細菌重新著色。
（二) 常用染色法
1．單染法
即用一種染液染色的方法。
（1) 染液①呂氏亞甲藍液：以亞甲藍乙醇飽和溶液（乙醇100 ml 含亞甲藍2～5g)30 ml 加蒸餾水100 ml 及10％氫氧化鉀0．1 ml 混合即成。②稀釋石炭酸復紅液：以堿性復
紅乙醇飽和液（乙醇100 ml 含堿性復紅3～7g)10 ml 與5％石炭酸液90 ml 混合， 配成石炭酸復紅染液。再將此染液以蒸餾水作10 倍稀釋即成。
（2) 方法：在已固定的細菌涂片上滴加呂氏美藍液或稀釋石炭酸復紅，染1 分鐘，水洗，干后鏡檢。
（3) 結果：以呂氏亞甲藍染色， 菌體呈藍色。以稀釋石炭酸復紅染色，菌體呈紅色。
2．革蘭染色法
為最常用的細菌復染法。
（
1) 染液：第一液：取結晶紫乙醇飽和液（乙醇100 ml 含結晶紫7 ～14g)20 ml 與醫學全在,線1 ％草酸銨水溶液80 ml 混合過濾即成。第二液：碘1g ，碘化鉀2g ，加少量蒸餾水，充分振搖，溶解后加水至300 ml 。第三液：95 ％ 乙醇或用乙醇、丙酮（7 ∶3) 混合液。第四液：稀釋石炭酸復紅液（同單染法) 或沙黃溶液（2．5 ％沙黃乙醇液10 ml 加水90 ml)。
（2) 方法：將第一液滴加在已固定的細菌涂片上，染1 分鐘，水洗。再以第二液媒染1 分鐘，水洗。繼以第三液脫色。輕搖玻片，到無紫色脫落為止，水洗。最后以第四液復染0．5 分鐘，水洗，干后鏡檢。
（3) 結果：革蘭陽性菌呈紫色，革蘭陰性菌呈紅色。
3．抗酸染色法
（1) 染液：①石炭酸復紅染液：同單染法，但不需用蒸餾水稀釋。②脫色劑：為鹽酸乙醇。③復染液（呂氏亞甲藍液) 同單染法。
（2) 方法：在涂片上滴加石炭酸復紅染液，玻片遠離火焰使微微加熱而有蒸汽，染液因蒸發而減少，需隨時補加染液，防止干涸。如此維持5 分鐘。待冷后，水洗。滴加脫色劑，輕搖玻片，到無紅色流出為止，脫色時間約1 分鐘。水洗。再滴加復染液復染0．5 分鐘，水洗。干后鏡檢。
（3) 結果：抗酸菌呈紅色，背景及其他細菌呈藍色。
4．金胺染色法
（1) 染液：① 金胺“O ” 染液： 金胺“O ”0．1g 溶于95 ％ 乙醇10 ml，另取石酸3 ml 加水87 ml 中。將上述兩液混勻（若有渾濁，不必過濾)，裝人褐色瓶中，保存在室溫中。②0．5 ％鹽酸乙醇。③0．5 ％高錳酸鉀液。
（2) 方法：在細菌涂片上加金胺“O” 染液，染15 分鐘，水洗后用0．5 ％鹽配乙醇脫色2 分鐘，水洗，再加0．5 ％高錳酸鉀液作用3 分鐘，水洗， 待干，用熒光顯微鏡觀察。
（3) 結果：抗酸菌呈亮黃色熒光。
5．阿爾培（Albert) 異染顆粒染色法
（1) 染液：第一液： 甲苯胺藍0．15g ， 孔雀綠0．2g 溶于95 ％ 乙醇2 ml 中， 加水100 ml 及冰乙酸1 ml ，靜置24 小時，濾紙過濾。第二液：碘化鉀3g 溶于蒸餾水10 ml ，加
碘2g ，溶解后再加水至300 ml 。
（2) 方法：在涂片上加第一液染色3 ～5 分鐘，水洗后第二液染色1 分鐘，水洗，待干后鏡檢。
（3) 結果：異染顆粒呈藍黑色，菌體呈綠色。
6．奈瑟（Neisser) 異染顆粒染色法
（1) 染液：第一液：亞甲藍100 mg 溶于無水乙醇2 ml 中，加入5 ％冰乙酸98 ml ，充分混合，過濾。第二液：俾斯麥褐1g 溶于無水乙醇10 ml 后，加水至100 ml ，充分混合。過濾。
（2) 方法：在細菌涂片上滴加第一液，染色30 秒至1 分鐘，水洗后，再以第二液染色30 秒至1 分鐘，水洗，干后鏡檢。
（3) 結果：白喉桿菌菌體染成淡黃褐色，異染顆粒呈深藍色。
7．黑氏（Hiss) 莢膜染色法
（1) 染液：①結晶紫染色液：結晶紫乙醇飽和液5ml 加水95ml 。②20 ％硫酸銅水溶液。
（2) 方法：細菌涂片自然干燥后用乙醇固定。滴加結晶紫染液，加溫染1 分鐘，不
用水洗，用20 ％硫酸銅溶液中沖洗后，以吸水紙吸干鏡檢。
（3) 結果：菌體呈紫色，莢膜為淡紫色或無色。
8．奧爾特（Olt) 莢膜染色法
（1) 染液：30 ％沙黃水溶液（乳缽研磨溶化)。
（2) 方法：在細菌涂片上滴加染液，用火焰加溫染色3 分鐘，冷后水洗， 待干后鏡檢。
（3) 結果：菌體呈褐色，莢膜呈黃色。此法主要用于炭疽桿菌的莢膜染色。
9．芽胞染色法
（1) 稀釋石炭酸復紅液（同單染法)，95 ％乙醇，堿性亞甲藍液（同單染法)。
（2) 方法：滴加石炭酸復紅液， 加溫染5 分鐘，水洗后用乙醇脫色2 分鐘，水洗，滴加亞甲藍液染1 分鐘，水洗，待干鏡檢。
（3) 結果：菌體呈藍色，芽胞呈紅色。
10．魏—張鞭毛染色法
（1) 染液：飽和鉀明礬液5 ml ，5 ％石炭酸液5 ml ，20 ％鞣酸液2 ml ，三者相互混合。臨用時加堿性復紅乙醇飽和液1 ml ，混合后靜止過夜，次日過濾后使用。此染液以
3 天內使用效果最佳。
（2) 方法：①先將細菌在肉湯培養基中傳代6 ～7 次。② 取出斜面培養基管內的凝結水，換以無菌生理鹽水2 ml 。③取細菌的肉湯培養物一環，接種在斜面瓊脂與護士招聘網鹽水交界處，再自該部