細菌肥達反應實驗

傷寒桿菌“H”菌液傷寒桿菌“O” 菌液

診斷血清生理鹽水

小試管吸管

1． 取潔凈小試管14只分兩排排列于試管架上，每排7只依次用蠟筆注明號碼，于每管中分別加入0.5 ml生理鹽水。

2． 在第1排第1管中加入1∶10稀釋傷寒"H"血清0.5 ml，使血清與鹽水充分混合，而后吸出0.5 ml注入第2管，同樣予以混勻后吸出0.5  ml注入第3管。以此類推，稀釋到第6管，自第6管吸出0.5 ml棄去。此時，自第1管至第6管的血清稀釋倍數為1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640。第7管不加血清作為對照。

3． 同法用吸管吸取1∶10稀釋傷寒桿菌"O"血清加入第2排第1管，并依次如上法予以稀釋。

4． 用移液管吸取傷寒桿菌"H"菌液，加入第1排各管中每管0.5 ml，此時血清稀釋倍數又增加了一倍。

5． 同法于第2排各管中加入傷寒"O"菌液0.5 ml。

6． 將各管振蕩混勻，放37℃水浴箱中2~4h或37℃孵育箱中過夜，次日取出觀察結果。

觀察切勿搖動試管，以免凝集塊分散

1． 對照管無凝集現象，管內液體仍呈混濁狀態。但如放置時間較長，細菌堆于管底成小圓點狀，為陰性反應。

2． 試驗管與對照相比可見管底有不同大小的圓片狀邊緣不整齊的凝集物，上清則澄清透明或不同程度混濁。凝集的強弱可用“+”號表示如下：

“++++”凝集很強，管內液體完全澄清，凝集塊完全沉于管底；

“+++”凝集強，管內液體不完全澄清稍有輕度混濁，凝集塊沉于管底；

“++”凝集中等強度，液體半澄清，凝集塊沉于管底；

“+”凝集弱，管內液體混濁，少量凝集塊沉于管底；

“－”不凝集，管內液體和對照管同樣混濁，無凝集塊。

3． 記錄觀察的結果并判斷凝集效價。通常以能產生明顯凝集（++）的血清大于稀釋倍數作為該血清的凝集效價。如血清的最低稀釋度（即第1管1:40）仍無凝集應報告為低于1:40。如血清的最高稀釋度（即第6管1:1280）仍顯完全凝集現象，應報該血清效價高于1:1280。