細辛腦的藥動學和生物利用度的檢測方法

 

細辛腦是根據中藥石菖蒲中主要有效成分a-細辛腦(2，4，5-三甲氧基-1-烯基苯，又名a-Asarone)，經人工合成的具有止咳平喘和抗癲癇作用的藥物。由于該藥進入人體后的血藥濃度非常低，因此對其進行藥動學研究和生物利用度測定存在一定困難，必須找到一種靈敏度高、專一性強的定量檢測方法。生物利用度是指藥物活性成分從制劑釋放吸收進入全身循環的程度和速度，美迪西可以為客戶提供生物利用度研究服務。

建立以反相高效液相色譜法測定人血清中細辛腦濃度的方法，以用于細辛腦的生物利用度測定。方法：采用Shimpack CLCODS(150mm×6.0mm，lOμm)為色譜柱，以甲醇-水(80：20)為流動相，流速為lml/min，熒光激發波長為265nm，發射波長為365nm，柱溫為40℃。結果：細辛腦最低檢出濃度為0.2ng/ml，線性范圍為1～200ng/ml；日內RSD≤6.74%(n=3)，日間RSD≤4.95%(n=5)。結論：此方法簡便、靈敏，測定結果準確，適用于細辛腦藥動學和生物利用度的研究。

1、 實驗方法

（1）試劑與儀器

細辛腦對照品(桂林制藥二廠提供，批號：981006)；細辛腦片劑1、細辛腦片劑2(均由湖北省藥檢專科學校研制，批號：20000301、20000405)；細辛腦注射液(桂林制藥二廠，批號：981006)；甲醇(優級純，北京化工廠)；其它試劑均為分析純。LC-6A型高效液相色譜(HPLC)儀、RF 535型熒光檢測器(日本Shimadzn)。

（2）色譜條件

色譜柱：Shimpack CLC ODS(150mm×6.0mm。10μm)：保護柱：Shimpack G ODS(10mm×4.0mm，10μm)；流動相：甲醇-水(80：20)；流速：lml/min;柱溫：40℃ ;熒光激發波長：265nm，發射波長：365nm。

（3）血樣處理

取血清0.2ml，加入2.5ml二氯甲烷，旋渦振蕩2min，再以2O00g離心10min，下層液全部轉移至另一尖底試管中，置于35℃水浴鍋中，并用氮氣揮干。殘留物用50μl甲醇溶解后，取20μl進樣。

（4）標準曲線的制備

精密稱取細辛腦對照品50mg，置于5Oml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配成濃度為lmg/ml的標準貯備液。臨用前再以甲醇稀釋成一定濃度的系列標準工作溶液，分別精密量取適量，加入0.2ml空白人血清中，配制成濃度為1、5、25、50、100、200ng/ml的標準血清，按照上述血樣處理方法進行處理。

（5）計算

以外標法計算細辛腦含量。

2、結果

（1）色譜行為

在色譜條件下，細辛腦峰形對稱陡峭，無內源性物質峰干擾，保留時間為7.68min。

（2）標準曲線與線性范圍細辛腦濃度(Y)在1～200ng/ml范圍內，與峰高(X)呈良好的線性關系，回歸方程為Y =20.87X—7.98，r=0.9998。血清最低檢出濃度為0.2ng/ml。

（3）回收率與精密度試驗

在標準曲線濃度范圍內，選擇2。5、10、40、75、150ng/ml 5種濃度進行方法回收率試驗，每種濃度日內平行操作測定3次，日間平行操作測定5次。可知，其平均回收率為(101.18±1.77)%，RSD=1.75%。

3、應用

應用本文建立的測定方法，對采用不同生產工藝的細辛腦片劑進行了生物利用度研究，即對18名健康志愿者單劑量交叉給予細辛腦片劑1(120mg)、細辛腦片劑2(120mg)和細辛腦注射劑(16mg)后測定受試者血清中的細辛腦濃度。經計算，細辛腦片劑1的絕對生物利用度為(5.4±1.6)%，細辛腦片劑2為(9.5±2.5)%。以細辛腦片劑1為參比制劑，細辛腦片劑2的相對生物利用度為(181.9±15.2)%。證明細辛腦片劑2(經生產工藝改造)生物利用度提高了81.9%。

細辛腦在258nm波長處有最大吸收，但其在人血中的濃度極低，只達到ng/ml級，采用紫外檢測器達不到測定要求。根據細辛腦化學結構的特點(含3個甲氧基和1個丙烯基的苯環)，選用熒光檢測法，靈敏度大大提高，高于薄層色譜法和HPLC—UV法細辛腦被吸收后可迅速進入紅細胞內，其在全血、血球及血漿中的濃度以血球中為最高”。故分離血清時，應特別小心不能發生溶血情況。

細辛腦熔點低，在加溫揮干二氯甲烷時，溫度最好不超過35℃。另外，本法測定的濃度范圍較寬，低濃度定量往往誤差較大，因此操作時可將標準曲線分為兩個濃度范圍，以減少測定誤差。