以日本Sysmex R-3000為例,在分析細胞時,由于大小和RNA含量顯著不同,血小板首先從成熟紅細胞和網織紅細胞的區域被區分出來;進而成RBC和網織紅細胞也被分為兩個區域,并且網織紅細胞百分比和絕對值也計算出來了。計算機的運算曲線是適合熒光強度直方圖測定網織紅細胞的,熒光強度反映出成熟RBC與網織紅細胞混合物中后者的細胞總數,R-3000/R-2000從RBC中分離網織紅細胞的界限的設置,是以當次分析中成熟RBC的分布為依據。儀器顯示出的散點圖可以反映網織紅細胞的成熟階段,根據熒光強度,還可將網織紅細胞分成 低熒光強度網織紅細胞(Low Fluorescent Reticulocyte簡稱LFR)、中熒光強度網織紅細胞(Middle Fluorescent Reticulocyte簡稱MFR)和高熒光強度網織紅細胞(High Fluorescent Reticu1ocyte簡稱 HFR)部分。幼稚的網紅顯示最強的熒光,反之成熟紅細胞極少或沒有熒光。網織紅細胞在臨床上的應用大致為以下幾個方面:
一、骨髓移植(BMT)
RET數單項升高也不意味著造血功能的恢復, RBC生成正常的情況下,R-3000/R-2000很難在外周血中查見HFR這樣的幼稚的網織紅細胞,但造血受到刺激時,較多的不成熟細胞就從骨髓釋入外周血,因此HFR的增長暗示著RBC生成的開始。也就是說,HFR變化較網織紅細胞總數變化具有更重要的意義。 Batjer-JD等就此得出了深入的結論,他們用R-1000觀察了30例異體、8例自體骨髓移植病人移植病人移植后44天內各項血液數變化,發現MFR+HFR在13.31天均值開始回升,其次為WBC(14.8天),儀器法 :RBT絕對值(16.2天)和目測法RET絕對值(16.5天),提示MFR+HFR是估計移植后造血恢復的早期指標。 J·Kanold等發現,自體、異體移植后HFR的出現(至少兩次成功計數達到2%或0.1X10e9/L)早于 RET數絕對值達到20X10e9/L,也比單核細胞達到0.05X10e9L、RET數達20X10e9/L,以及中性粒細胞 達到0.5X10e9/L都要早,如圖13所示。所以,評估BMT后的紅細胞生成情況,HFR計數提供了早期 測量依據,同時也比監測單核細胞水平更為精確和實際。
二、貧 血
對骨髓移植患者的研究證實HFR和MFR可能是反映造血功能的關鍵的新參數, Kojima等人在貧患者也得出同樣的結論,以Hb120~160g/L、MCV 90~100f1、MCH 27~34pg的患者作為健康組; WBC<3X10e9/L、PLT<50X10e9/L的化療后紅細胞生成抑制者為骨髓抑制組,以慢性溶血性貧血患者為 溶貧組,測得的網織紅細胞數、HFR及LFR項參數有力地支持了上述結論。與貧血組相 似,血液透析組HGB為100g/L或更低,HFR上升,LPR下降,但是RET數不升高;因此,可將網織紅細計數及其分類作為鑒別診斷的初篩指標。老年健康組與健康對照組具有相似的特征,說明這些參數無年 齡差異。老年貧血組RET數減少,但RET%卻與健康組相似。
三、海洋性貧血
G.Paterakis等的研究顯示,海洋性貧血雜合體RET%和RET#明顯高于正常對照,所以建立健康(24~44y)RET%參考值時應注意排除Hb正常的雜合體。正常者RET%雖無性別上的明顯差異,但女性偏高。網織紅細胞分類(HFR、 MFR、 LFR)無性別差異。正常人與雜合體貧血的HFR、 MFR、LFR 也無顯著差異,故建立參考值時不必排除地貧。異性間由于RBC計數的不同而存在著網織紅細胞計數的 不同,但雜合體女性RET%明顯高于男性(P<0.001)。因此,貧血雜合體男女兩性RET數的不同無顯著意義。 眾所周知,地貧以無效造血和紅細胞壽命縮短為特點,網織紅細胞計數與HGB水平變化相反,輕度貧血或非貧血病人,網織紅細胞增長可能非常細微以至手工計數察覺不到,而使用精確的自動計數技術 明顯多了。
四、骨髓增生異常綜合征(MDS)
一般說來,MFR在HFR之前進入循環,暗示紅細胞生成規律性恢復的開始。L.Kuse認為:少量 MFR可以作為MDS化療后粒系恢復的早期指標,且比RET絕對值更敏感。
五、放療與化療
通過流式法網織紅細胞分析可獲得骨髓增生特別是紅系增生及放、化療的細胞毒副作用的信息在造 血反應中(如葉酸和VitB12)治療后或化療后造血恢復中可見網織紅細胞短暫迅速的增高。 當HGB下降、組織氧化受阻時,EPO生成增多,EPO促使干細胞向原始紅細胞分化,也加速網織紅 細胞釋放。因此,EPO增加,HFR也增多,并伴有網織紅細胞的增多。化療后骨髓EPO功能恢復早期 HPR增多比網織紅細胞總數恢復早,這種反應時間的不同體現了EPO與HFR之間的密切關系。 另有實驗表明長期接受Cisplatin化療的卵巢癌患者網織紅細胞計數往往在HGB減少之前上升。 Mugurama等應用Sysmex R一1000系統觀察了27例白血病和淋巴瘤患者化療期間網織紅細胞亞群的 變化,發現有14例(3.89%)在化療開始時HFR和(或)MFR早 于LFR,中性粒細胞及血小板降低,HFR、MFR與其它參數同時 降低為57.2%,在骨髓恢復期,52.8%的病例HFR和/或MFR 迅速升高,WBC、PLT同時升高的僅占25%,提示幼稚網織紅細 胞變化是造血系統腫瘤化療時,骨髓受抑制和恢復較敏感指標。,抗白血病藥物對紅細胞生成的抑制使 RET絕對值降至幾乎為零,HFR顯著上升提示著患者進入恢復 期。 Kageoka等用R-3000分析發現末梢血網織紅計數優于白細胞計數和血小板計數分析骨髓造血狀態。在化療后,骨髓抑制的恢復早期末梢血HFR升高出現較早,骨髓RET%高于末梢血的3倍,巨幼貧、MDS或DIC的病人骨 髓RET%均較末梢血有明顯的增高。