什么是診斷血清?
用于檢測各種生物體抗原的含有特定凝集素的液體產品
用于血清學中研究生物組織以確定其具體血清分型 (主要用于流行病學目的)
它是如何制造的?
用特定生物體給健康兔子進行超免疫接種。收集產生的抗體，加熱， 過濾 ，吸收，最后制成成品
診斷血清的種類
多價診斷血清包含幾個不同的診斷血清抗體，并作為初次篩選使用
單價診斷血清 包含一種單一抗體并且經常在多價診斷血清縮小抗原選擇范圍后使用
混合診斷血清 包含所有的抗體. 例- 沙門菌屬乳膠
如何進行血清分型?
玻片凝集法
試管凝集法
玻片凝集法
用甲醛生理鹽水對機體組織進行懸浮沉降
在一張載玻片上滴上一滴診斷血清和一滴待檢菌液
用鉑絲混合2滴液體,輕搖載玻片，1分鐘后觀察凝集情況
有明顯凝集出現即為陽性
試管凝集法
將培養液在37度環境下放置6-8 小時
用甲醛生理鹽水稀釋培養液
滴入.05ml 的診斷血清和.5ml 的稀釋待檢菌液到一個 12 x 75 的試管中
(2種方法始終保持在生理鹽水的環境下，以監控自動凝集)
混合，在 52度下靜置1小時.
檢查凝集情況 (不要搖晃)
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沙門菌屬分類
超過3000種的沙門菌屬血清分型
3 種抗原
O- 體細胞 (細胞壁) 最先被發現確定
H- 鞭毛型
Vi- 莢膜型
考夫曼懷特沙門菌屬診斷抗原表
O組抗原被編號為 1-67
血清群組A-Z代表整個沙門菌屬群，以共享通用抗原為基礎，超過51種
H組抗原被劃分為 a-z + z1, z2 ect
Vi抗原是一種可能隱藏在O組和H組里的莢膜型抗原. 具有Vi抗原的沙門菌屬不會在O型診斷血清里凝集
生研 以世衛組織合作中心的推薦為基礎來參考和研究沙門菌屬，不再使用以字母順序排列的O組劃分名稱
“O”抗原的分類
玻片凝集法
先測定多價診斷血清
A-G (DK292484) or A-S(DK292476)
O多價 (DK211231) or O1多價 (DK211248)
用特定的單價診斷血清來測定 “O” 群組
測定“H” 抗原
試管凝集試驗
使用沙門菌屬參考手冊-通常使用體細胞(O)抗原類別來測定鞭毛抗原
分類隔離-給予特定的 “H” 多價和/或 單價診斷血清
大多數沙門氏菌是雙相的-所以將會有2個 “H”抗原需要測定-相誘導
相誘導法
如果只有一個 “H” 抗原被檢測出來
必須誘導出隱性鞭毛抗原以識別第二個 “H”
滴入.1ml相誘導診斷血清 (對應特定的H抗原)到一個含有3ml 半液體培養基的試管中(在50oC下加熱溶解,避免煮沸起泡)
混合并且垂直地無菌放置在一個克雷吉管中
允許冷卻 – 在克雷吉管中接種并且在37oC下靜置過夜
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相誘導法續...
有一個“隱性相”的細菌 (或者是第二相)
將遷移到該試管的外表面介質
移植到H肉湯等待6-8小時后重復第二個H診斷血清 (試管法) 來測定隱性抗原
注意事項
當H診斷血清含有疊氮化鈉時不能用于相誘導
沙門氏菌的H血清在誘導期不含防腐劑，因此所有過程需要無菌操作。
Vi抗原檢測
莢膜型抗原可能會偽裝成體細胞抗原反應
如果所有的多價O型診斷血清測試為陰性則能與Vi診斷血清相區分
當在Vi診斷血清里得到一個陽性反應
將細胞懸濁液在100oC下加熱1小時，然后重復測定多價O型和Vi型.
如果O多價目前是陽性，Vi是陰性，那么這將會被視為S分型
如果O多價仍為陰性，Vi為陽性，則組織液可能不是沙門菌屬并建議復驗試驗隔離