1、電泳條件的選擇
為了選擇血清蛋白電泳較合適的條件,我們分別對單體濃度、雙體濃度、配制凝膠時所用不同正離子、各種電壓、二甲氨基丙腈的濃度、過硫酸銨的濃度等條件進行了試驗。根據以上試驗結果,我們在分離血清蛋白時選用的條件是:單體濃度6.25-6.5%,雙體占總丙烯酰胺量的4-5%,正離子采用三羥甲基氨基甲烷,二甲氨基丙腈及過硫酸銨濃度分別為0.25%及0.7%。電泳電壓以7-10V/cm較為合適。但電泳時間較長,約2-3小時,室溫低時可以電壓稍高。如果室溫較高則可以在冰箱中進行電泳。
2、人血清及其酒精分劃部分的凝膠電泳
采用上述條件我們進行了正常人血清的凝膠電泳。一般可以分成15-20條區帶。根據兩向電泳方法比較了紙電泳和凝膠電泳各區帶的相對關系。紙電泳上的a:區帶在凝膠電泳中可被分離成10條以上區帶。但紙電泳中d,區帶的一部分則與凝膠電泳中自蛋白區帶相重合。在正常人血清中后白蛋白(PA)、轉鐵蛋白(Tr)和觸珠蛋白(HP)均有不同的型。較純晦白蛋白和丙種球蛋白部分,在凝膠電泳中可見明顯的其他蛋白區帶。
3、放射病狗血清蛋白電泳的觀察
放射病動物血清蛋白的改變可以在紙電泳中觀察到。一般認為狗在照射后吻球蛋白有增高。用凝膠電泳觀察可以得到更深入的資料。正常狗血清的凝膠電泳圖譜大致人相似。狗受致死量照射后第九天有明顯變化。我們用3-10型光 譜儀用光密度計將電泳圖譜進行了掃描。由于儀器的限制光縫最小只能達到0.5mm,從而影響了其分辨力。但與正常血清對比可以見到其改變的情況,這遠比紙電泳中所見更為明顯。
4、在分離正常人尿DNase時的凝膠電泳
觀察用葡聚糖凝膠分離人尿中DNase時可以除去大部分其他蛋白質和雜質。但分離所得的制品用凝膠電泳觀察還可以見到五條以上的蛋白質區帶。將凝膠條在未染色前置于含大分子DNA的瓊脂平板上,在37℃溫箱中保溫2-3小時,再用5%三氯醋酸加至如此處理過的瓊脂板上,可以看到乳白色本底上出現被酶水解后的透明斑點。將凝膠條用氨黑染色后顯示其蛋白區帶的位置。二者比較就可以確定具有酶活性的成分的相應電泳位置。我們的試驗中觀察到人尿DNase在凝膠電泳中至少被分離成二條以上有酶活性的區帶。說明有同功酶的可能。應用這一方法可以較深人地觀察體液中酶的情況。同時也說明可以用凝膠電泳來指示生物制劑制備過程中純化的情況。