聚乙二醇法
| 實驗方法原理 |
聚乙二醇（PEG）是一個非離子水溶性多聚體，使用 PEG 沉淀蛋甶質時，只在個別濃度下才使蛋白質稍有變性。由于 PEG 溶解時散熱低，形成沉淀的子衡時間短等特點，使它在蛋白質的組分分離以及結晶中成為一個有用的試劑。通常 PEG 終濃度達 30％ 時，蛋白質就能夠達到最大量沉淀。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 蛋白質溶液 |
| 試劑、試劑盒 | 聚乙二醇 6000 |
| 儀器、耗材 | 燒杯 磁力攪拌器和攪拌子 離心機和轉頭 |
| 實驗步驟 |
1. 向 100 ml 蛋白質溶液中，在緩慢攪拌下加入 150 ml 50％ PEG 6000（w／v 溶于蒸餾水）； 2. 繼續攪拌 30～60 min，至完全沉淀為止； 3. 10 000×g 離心 10 min； 4. 除去上清； 5. 用 1～2 倍沉淀體積的緩沖液再懸浮沉淀。
展開 |
| 注意事項 |
1. 在等電點附近蛋白質溶解度降低。 2. 用硫酸銨沉淀法能夠除去 PEG。也可采用離子交換層析，也有報道指出高濃度 PEG 使凝膠過濾柱層析行為異常。 |