聚合酶鏈式反應（PCR）詳細步驟

一、準備工作

1、實驗器具與材料：

（1）移液槍：200ul、10ul

（2）吸頭：200ul、20ul

（3）吸頭臺：放置200ul和20ul的吸頭一個

（4）EP管1.5ml、100ul

2、實驗器具的處理與準備

塑料制品：（包括吸頭、EP管等）

送至高壓3次，試驗前將槍頭放入吸頭臺。

3、試劑配制和準備：

（1） 雙蒸水： 100ml鹽水瓶內裝40ml蒸餾水，送至高壓，后分裝到幾個1。5mlEP管中，-20℃中保存備用。

（2） PCR中所需要的各種試劑

二、PCR時注意事項：

佩戴一次性手套，同時避免戴上的一次性的手套接觸可疑污染物。

三、PCR步驟

1、準備100ul EP管

2、依次在管中加入：（50ul反應體系）

3、稍離心

4、100℃沸水浴1分鐘

5、趁熱加入Tag酶0.5ul（冰上操作）

6、再加入50ul液體石蠟封閉

7、10000rmp離心1分鐘

8、PCR條件

94℃ 1min

58℃ 50sec

72℃ 1min30sec

進行40個循環，然后72℃ 10min 完后4℃保溫。

9、10000rmp離心5min

10、將下層水相轉入新的0.65mlEP管中，－20℃保存。