實驗方法原理
自由氨基的封閉是通過在冰浴的 1％（質量濃度）亞硝酸鈉的 0.5 mol/L 鹽酸溶液中處理后，進一步在 40℃ 的該溶液中孵化 20 min 來實現的。
實驗材料 酶溶液
試劑、試劑盒 鹽酸己二胺二環己基碳二亞胺磷酸鉀NaCl
實驗步驟
1. 自由竣基的活化
聚酰胺小片在溶有 10 g/l 己二胺和 10 g/l 二環己基碳二亞胺的二氯甲醇溶液中于 10℃ 孵化 4 h。用二氯甲醇、丙酮和冰水各 10 ml 沖洗，除去自由乙二胺
在 10 ml 溶有 10 g/l 亞硝酸鈉的 0.5 mol/L 鹽酸中，0℃ 孵化 20 min 實現活化。其后，聚酰胺小片用 10 ml 冰的 1 mmol/L 鹽酸沖洗。
2. 酶結合到有活性的聚酰胺上并儲存
在沖洗聚酰胺小片之后，馬上添加酶溶液（0.2～0.5 mg/ml 溶于 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸鉀，小片必須完全沉浸在溶液中）在 4℃ 孵化 3 h。在玻璃料上用溶有 0.5 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸鉀沖洗，除掉沒有被固定的酶。其后，用 0.1 mol/L pH 7.5 的磷酸鉀沖洗來降低髙鹽的濃度。如果短期儲存，固定了酶的小片保存在 4℃ pH 7.5 的 0.1 mol/L 磷酸鉀中。如果長期儲存，這些小片迅速用水沖和用空氣干燥（這個過程對于很敏感的酶是不能承受的）
注意事項
其他
1. 材料
酶溶液（0.5 mg/ml 溶于 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸鉀中）
2. 耗材
0.5 mol/L 鹽酸
己二胺
二環己基碳二亞胺
準備己二胺、二環己基碳二亞胺溶液，都是二氯甲醇中含 1％（質量濃度）
0.1 mol/L pH 7.5 磷酸鉀
0.5 mol/L NaCl 溶于 0.1 mol/L pH 7.5 磷酸鉀中