當肝或腎以丙酮酸為原料進行糖異生時，糖異生中的其中七步反應是糖酵解中的逆反應，它們有相同的酶催化。但是糖酵解中有三步反應，是不可逆反應。在糖異生時必須繞過這三步反應，代價是更多的能量消耗。
這三步反應都是強放熱反應，它們分別是：
1 葡萄糖經己糖激酶催化生成6磷酸葡萄糖 ΔG= -33.5 kJ/mol
2 6磷酸果糖經磷酸果糖激酶催化生成1，6二磷酸果糖 ΔG= -22.2 kJ/mol
3 磷酸烯醇式丙酮酸經丙酮酸激酶生成丙酮酸 ΔG= -16.7 kJ/mol
這三步反應會這樣被繞過
1 葡萄糖6磷酸酶催化6磷酸葡萄糖生成葡萄糖
2 果糖1，6二磷酸酶催化1，6二磷酸果糖生成6磷酸果糖。
3 丙酮酸在一元羧酸轉運酶的幫助下進入線粒體，在丙酮酸羧化酶的催化下，消耗一分子ATP，生成草酰乙酸。草酰乙酸不能通過線粒體膜。在蘋果酸-天冬氨酸循環里草酰乙酸通過了線粒體膜之后，在磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶的幫助下成為磷酸烯醇式丙酮酸。反應消耗一分子GTP。