肺炎支原體冷凝集實驗

【原理】 原發性非典型性肺炎患者血清中常產生冷凝集素。冷凝集素是一種自身抗體，在寒冷（4℃）情況下，可與紅細胞抗原起反應，一般可與O型人紅細胞或自身紅細胞發生凝集反應，可用于該病的輔助診斷。冷凝集反應具有可逆性，若將已凝集的紅細胞再放回37℃時，凝集現象即消失。
【材料】
1、患者血清：切勿將血液放在冰箱內析出血清，在冬季室溫低于-20℃時，可將標本置于37℃孵箱析出血清，隨即分離進行實驗。
2、人紅細胞懸液：“0”型血或患者自身的抗凝血以無菌,0.9%氯化鈉溶液稀釋至2%。
【方法】
1、于試管架上排列小試管10支，每管內各加0.9%氯化鈉溶液0.5ml。
2、加患者血清0.5ml于第1管內混勻后，吸出0.2ml加入第2管內，順次連續稀釋至第9管，混勻后棄去0.5ml。第10管不加血清作為對照。
3、每管內各加入25血細胞懸液0.2ml，振蕩混合后，置冰箱內24小時或過夜。此時各管血清最終稀釋度依次為1:4，1:8，1；16，1：32，1：64，1：128，1;256，1:512，1；1024
【結果】
1、冷凝集有可逆性，在較暖的室溫中，凝集現象迅速消失，故在冰箱內取出試管后，應立即觀察結果。
2、取出時盡量避免震動，先觀察管底紅細胞沉淀形狀，再輕搖試管，如有明顯的凝集現象，記錄凝集效價。
3、對照管內的紅細胞，輕搖后應完全分開，無凝集現象。
4、如遇陽性結果，最好將試管再放入37℃水浴箱內5—30分鐘，重新觀察一次，如紅細胞完全分散，凝塊消失，則證實為真正的冷凝集現象，否則可能由于其他凝集素所致，不作陽性報告。