實驗方法原理
實驗材料 質粒 DNA酵母株
試劑、試劑盒 Taq 聚合酶10×緩沖液引物 dATPdGTP dCTPdTTPMgCl2 MnCl2完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板Xgal 平板
儀器、耗材 PCR 管PCR 純化柱自動熱循環器 30℃ 培養箱
實驗步驟
實驗所需「材料」、「試劑」、「耗材」具體見「其他」
1. 制備 PCR 預混合物（共 3.775 ml）：
500 ul 10×Taq 聚合酶緩沖液
5 ul 1 mol/L MgCl2
10 ul 100 mmol/L dATP
10 ul 100 mmol/L dGTP
50 ul 100 mmol/L dCTP
50 ul 100 mmol/L dTTP
125 ul 20 umol/L 引物 1
125 ul 20 umol/L 引物 2
2.9 ml 水
2. 對每一個樣品，加入下列試劑到 PCR 管中：
12 ul 水
1 ul 肽適配體表達載體
10 ul Mg2+/Mn2+ 溶液
76 ul PCR 預混合物
1 ul Taq 聚合酶（5 U）
3. 用下列 PCR 反應程序進行擴增反應：
4 個循環：
30 s 95℃ （變性）
1 min 55℃ （復性）
1 min 72℃ （延伸）
4. 移出 13 ul 反應混合液到一新的 PCR 管中，新管中預先吸入：
10 ul Mg2＋/Mn2＋溶液
76 ul PCR 預混合物
1 ul Taq 聚合酶
用同樣的 PCR 程序擴增。
5. 重復總共 10 輪的擴增。
6. 用 PCR 純化柱或瓊脂糖凝膠電泳純化 PCR 產物。
7. 用 Ava II 消化純化的 PCR 產物，然后按照標準的亞克隆技術將其亞克隆到經 II 酶切過的 PJM-I1中。
8. 用乙酸鋰酵母轉化法將 pBait 和 pBR1840 轉入 EGY48 中。在 10 cm Glu/CM-His、-Ura 平板上篩選轉化株。
9. 用高效乙酸鋰方法將 10～50 ug 突變的肽適配體庫轉化含 pBait 和 pBR1840 的 EGY48。在 10 cm Glu/CM-His、-Ura、-Trp 平板上篩選轉化株。
10. 收集轉化株，測定平板效率。
11. 接種約 5 個庫等價物到 1 ml Gal/Raf/CM-His、 -Ura、-Trp 液體培養基中。于 30℃ 振蕩培養 4 h。
12. 室溫下，于 3000 g 離心 4 min。棄上清，將酵母沉淀重懸于 1 ml 無菌水中。
13. 將酵母涂布到 15 cm Gal/Raf/CM-His、-Ura、-Trp， X-gal 平板上，于 30℃ 培養至克隆出現（約 2 天）。
14. 將藍色克隆劃線接種到一 10 cm Glu/CM-His、-Ura、-Trp 主平板上并于 30℃ 培養 1 天。
15. 將主平板復印到 10 cm Gal/Raf/CM-His、-Ura、-Trp、X-gal 平板和 Glu/ CM-His、 -Ura、-Trp、X-gal 平板上。
16. 從依賴半乳糖的藍色克隆中回收質粒并重新導入，含有 pBait 和 pBR1840 的酵母株 EGY48 中以再次驗證表型。
17. 從依賴半乳糖的藍色克隆中回收質粒并對可變區進行測序。
注意事項
其他
1. 材料
質粒 DNA：肽適配體質粒，pBait，pJM-1， pRB1840（1-LexAop-LacZ 報道質粒）和 pJK103
酵母株：EGY48 Mata ura3 trpl his3 3LexA-operator-leu2
2. 試劑
5 U/ul Taq 聚合酶和 10×緩沖液（Life Technologies）
1 mol/L MgCl2
100 mmol/L dATP
100 mmol/L dGTP
100 mmol/L dCTP
100 mmol/L dTTP
20 umol/L 引物 1： 5'-CCGCCGCCTGAATTCATGAGCGATAAAATTATTCAC-3'
20 umol/L 引物 2： 5'-CGGGGCGATCATTTTGCACGGACC-3'
Mg2+/Mn2+ 溶液：45 mmol/L ，MgCl2 和 5 mmol/L MnCl2
PCR 純化柱（可選；如 Qiagen）
完全極限（CM） 缺失成分培養基和平板，補加 2％ （m/V） 葡萄糖 （Glu） 或 2％ （m/V） 半乳糖和 1％ im/V） 棉籽糖 （Gal/Raf）：
Glu/CM-His、-Ura （10 cm 平板）
Glu/CM-His、-Ura、-Trp （10 cm 平板）
Gal/Raf/CM-His、-Ura、-Trp （液體培養基）
Xgal 平板
Glu/CM-His， -Ura， -Trp， X-gal （10 cm 平板）
Gal/Raf/CM-His， -Ura， -Trp， X-gal （10 cm 和 15 cm 平板）
3. 耗材
PCR 管
自動熱循環器
30℃ 培養箱