腫瘤標志物檢測的影響因素和應用原則(4)

發布時間：2019-07-10 21:33 原文鏈接：腫瘤標志物檢測的影響因素和應用原則(4)

五、臨床免疫測定的標準化和質量控制中存在的問題

㈠臨床免疫測定標準化的一般原則

　臨床免疫測定標準化的目的，就是要改善實驗室測定結果的準確性，從而提高不同的實驗室之間結果的可比性。進行標準化的先決條件是，標準品和檢測物應該是相同的，否則標準化就無從談起。但目前的許多臨床免疫測定項目中，標準品往往沒有達到這一要求。涉及到免疫測定標準化的組織有，世界衛生組織（WHO）生物學標準化專家委員會（ The Expert Committee on Biological Standardization ，ECBS ），負責建立生物物質的國際標準及參比材料。 WHO 通過國家生物學標準和質控物研究所（ National Institute for Biological Standards and Control ，NIBSCC ）提供大多數多肽激素和一些腫瘤標志物的國際標準品。一些地區性組織也制備標準品，如美國的疾病控制中心（ Centers of Disease Control ，CDC ）、美國病理學家協會的國家委員會（ National Committee of the College of AmericanPathologists ）、國家衛生研究所（ National Institute of Health ，NIH ）等提供用于研究目的的多肽激素標準品。 IFCC 也已組織制備了一種脂蛋白和血清蛋白的標準品，其可通過CAP 得到。國際癌癥生物學和醫學學會（ International Society of Onco-developmental Biology and Medicine ）已起動一個腫瘤標志物抗原決定簇繪圖計劃。

表 2 各種免疫測定項目標準品的一般要求

要求	一級標準	二級標準	三級標準
來源	標準化專家委員會	多個	多個
使用時間	10 ～ 20 年	1 ～ 5 年	1 ～數年
制備	純化物質，置于含載體蛋白的緩沖液	純化材料，混合血清，含載體蛋白的緩沖液	血清或血漿，人工蛋白為基質的緩沖液
定值方法	多中心合作研究	與一級標準比對	與二級標準比對
貯存方式	凍干	-70 ℃ 保存	冰凍保存或凍干

㈡臨床免疫測定影響質量的三個主要因素是：抗原、抗體、基體（基質）

1 ．抗原、抗體

⑴ 確認樣品中被檢抗原和校準品中抗原的一致性。

⑵ 制備抗體時使用的抗原和樣品中抗原的一致性。

⑶ 抗原過剩的識別。

⑷ 試劑使用的是多克隆抗體，則抗體的純度很重要；試劑使用的是混合單克隆抗體則每批抗血清內各單克隆抗體的組成及相對比例很重要，并要保持恒定。另外，很多腫瘤標志物是糖蛋白或粘蛋白，糖基化的不均一性可能導致其免疫反應性某些變化，從而引起測定結果的差異。

⑸ 校準品穩定性、無混濁。

⑹ 抗原抗體反應時所處的基體（基質）狀況應保持恒定和一致。

2 ．基質效應

⑴ 免疫測定的基質效應是一個現象的描述，它是指干擾抗原、抗體反應，而與分析物本身無關的非特異性因素。同一基質狀態的基質效應隨方法及檢測條件而異。

⑵基質效應是絕對的，只要處理過的樣品和測定樣品的基質狀態不一，一定有基質效應，基質效應又是相對的，只要認可某一方法的基質效應可忽略不計，或者由基質效應對某方法引入的誤差在可接受水平，那么衡量另一方法是否具有基質效應時，應作方法學比較。若處理過的樣品和測定樣品的結果分布不同，說明基質效應明顯。反之屬可接受。也即認為“無” 基質效應。

⑶嚴格講，不同批號試劑，它們產生的基質效應也不一致。

⑷度量有無基質效應，或者了解不同方法間的可比性，最佳樣品是人新鮮樣本。

⑸一定要懂得單一標準液，校準品，質控品和新鮮樣品間的區別，并正確使用。

⑹不應用質控品作校準品去校準儀器，不僅是基質差異，而且是校準品和質控品定值的水平不一。

⑺ 室內質控用的質控品僅用于各檢驗科日常工作中重復性和精密度的控制。由于各檢驗科的檢驗方法和廠商定值的方法不一致，不可將定值血清的靶值來定值。

⑻衡量某一方法或試劑是否準確可靠，唯一可信的方法是使用人新鮮樣本進行比較，僅以控制品測定值相似或等于定值，不足以說明方法的準確度。

⑼校準品是公司指定用來校準某測定系統（儀器＋試劑＋方法程序）的，是考慮到它具有基質效應的情況下，人為賦予校準品的校準值。因此校準品必須專用于某一測定系統。應鼓勵檢驗科使用儀器廠商指定的試劑和校準品。

⑽同一個校準品用于不同儀器時，應該有不同的校準值。不輕易使用某一校準品的校準值對于各種儀器作校準。