鑒別
(1)照紫外-可見分光光度法(通則0401)測定供試品溶液取已測得效價的本品適量,精密稱定,加純度項下的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)溶解并定量稀釋制成每1ml中含10單位的溶液。精密量取4ml,置10ml量瓶中,用上述磷酸鹽緩沖液(pH7.0)稀釋至刻度。測定法取效價測定酶活力項下的底物溶液2.9ml,在30℃±0.5℃預熱5分鐘,置1cm比色池中,精密加入供試品溶液0.1ml,混勻,立即計時,使比色池內的溫度保持在30℃±0.5℃,在253nm的波長處測定,以上述磷酸鹽緩沖液(pH7.0)0.1ml代替供試品溶液,同法操作,作為空白對照準確讀取4分鐘時的吸光度(A4)和6分鐘時的吸光度(A6)求得A值[(A6-A4)/2],按下式計算。AR0.0383a×b式中a為供試品溶液每1ml中的毫克數b為供試品每1mg的效價單位數。結果判定R值(水解速率)應為0.12~0.17。(2)在純度項下記錄的色譜圖中,供試品溶液主峰的保留時間應與對照品溶液主峰的保留時間一致。
檢查
酸堿度取本品適量,加水溶解并稀釋制成每lml中含300單位的溶液,依法測定(通則0631),pH值應為溶液的澄清度取本品適量,加水溶解并稀釋制成每lml中含2mg的溶液,依法檢查(通則0902第一法),溶液應澄清。(供注射用)脂肪取本品1.0g,置具塞錐形瓶中,加乙醚20ml,密塞,時時旋動,放置約30分鐘后,將乙醚液傾至用乙醚潤濕的濾紙上,濾過,再用乙醚10ml洗滌殘渣,合并濾液及洗液至已恒重的蒸發皿中,除去乙醚,在105℃干燥2小時,精密稱定,遺留脂肪不得過5mg相關蛋白酶照紫外-可見分光光度法(通則0401)測定。供試品溶液取本品適量,加純度項下的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)溶解并稀釋制成每1ml中含1單位的溶液。測定法精密量取供試品溶液1ml置試管中,在35℃±0.5℃水浴中保溫5分鐘,精密加入已預熱至35℃±0.5℃的酪蛋白溶液(取酪蛋白0.6g,加0.05mol/L磷酸氫二鈉溶液80m1l,65℃加熱溶解,放冷,調節pH值至8.0,用水稀釋至100ml,臨用前配制)5ml,混勻,于35℃±0.5℃水浴中準確反應20分鐘,再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml,混勻,濾過,取續濾液作為測定溶液;另精密量取供試品溶液1ml,置試管中,精密加入5%三氯醋酸溶液5ml,混勻,于35℃±0.5℃水浴中準確反應20分鐘,再精密加入上述酪蛋白溶液5ml,混勻,濾過,取續濾液作為空白,在2小時內,在280nm的波長處分別測定吸光度。限度吸光度不得過0.2。純度照高效液相色譜法(通則0512)測定。磷酸鹽緩沖液(pH7.0)取磷酸氫二鈉10.9g,磷酸二氫鈉2.3g,加水溶解并稀釋至1000ml,用50%磷酸溶液調節pH值至7.0。供試品溶液取本品適量,加流動相A溶解并稀釋制成每1ml中約含200單位的溶液。對照品溶液取胰激肽原酶對照品(純度應大于95%)適量,加流動相A溶解并定量稀釋制成每1ml中約含200單位的溶液色譜條件用疏水性凝膠為填充劑( TSKgel Phenyl-5PW,7.5mm×75mm,10pm或其他適宜的色譜柱);以含1.7mol/L硫酸銨的磷酸鹽緩沖液(pH7.0)為流動相A,以磷酸鹽緩沖液(pH7.0)為流動相B,按下表進行梯度洗脫;柱溫為25℃;流速為每分鐘0.5ml;檢測波長為280nm;進樣體積20pl時間(分鐘)流動相A(%)流動相B(%)100100100系統適用性要求理論板數按胰激肽原酶峰計算不低于1500,胰激肽原酶主峰與相鄰雜質峰之間的分離度不得低于0.8。測定法精密量取流動相A、供試品溶液與對照品溶液分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。將供試品溶液與對照品溶液的色譜圖扣除流動相A色譜圖(作為空白基線),進行基線校正限度供試品溶液色譜圖中,量取空白基線拐點(約16分鐘)后所有色譜峰面積,按面積歸一化法計算,與對照品溶液主峰保留時間一致的主峰面積不得低于75%(供口服用)或90%(供注射用)。干燥失重取本品0.50g,以五氧化二磷為干燥劑,在0℃減壓干燥4小時,減失重量不得過5.0%(通則0831)熾灼殘渣取本品0.50g,依法檢查(通則0841),遺留殘渣不得過3.0%細菌內毒素取本品,依法檢查(通則1143),每1單位胰激肽原酶中含內毒素的量應小于2.5EU。(供注射用)