照紫外-可見分光光度法(通則0401)測定底物溶液制成后應在2小時內使用。取N-苯甲酰L精氨酸乙酯鹽酸鹽85.7mg,加水溶解使成100ml,作為底物原液;取10ml,用磷酸鹽緩沖液(取0.067mol/L磷酸二氫鉀溶液13ml與0.067mol/L磷酸氫二鈉溶液87ml混合,pH值為7.6)稀釋成100ml,恒溫于25.0℃±0.5℃,以水作空白,在253mm的波長處測定吸光度,必要時可用上述底物原液或磷酸鹽緩沖液調節,使吸光度在0.575~0.585之間供試品溶液取本品適量,精密稱定,加0.001mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中含50~60胰蛋白酶單位的溶液。測定法取底物溶液3.0ml,加0.001mol/L鹽酸溶液200μl,混勻,作為空白。另精密量取供試品溶液2004,加底物溶液(恒溫于25.0℃±0.5℃)3.0ml,立即計時,混勻,使比色池內的溫度保持在25.0℃士0.5℃,在253nm的波長處,每隔30秒讀取吸光度,共5分鐘。以吸光度為縱坐標,時間為橫坐標,作圖;每30秒吸光度的改變應恒定在0.015~0.018之間,呈線性關系的時間不得少于3分鐘。若不符合上述要求,應調整供試品溶液的濃度,再作測定。在上述吸光度對時間的關系圖中,取成直線部分的吸光度,按下式計算。P 0.003TW 式中P為每1mg供試品中含胰蛋白酶的量,單位;A1為直線上終止的吸光度;A2為直線上開始的吸光度;T為A1至A2讀數的時間,分鐘;W為測定液中含供試品的量,mg;0.003為在上述條件下,吸光度每分鐘改變0.003,即相當于1個胰蛋白酶單位