脂肪酸的β氧化

原理
根據β-氧化學說，機體組織能將脂肪酸氧化生成乙酰輔酶A。兩分子乙酰輔酶A可再縮合成乙酰乙酸。在肝臟內，乙酰乙酸可脫羧生成丙酮，也可還原生成β-羥丁酸。乙酸乙酸、β-羥丁酸和丙酮總稱為酮體。酮體為機體代謝的中間產物。在正常情況下，其產量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食時，血中酮體含量增高，尿中也能出現酮體。
本實驗用新鮮肝糜與丁酸保溫，生成的丙酮可用碘仿反應測定。在堿性的條件下，丙酮與碘生成碘仿。
操作方法
擊斃動物（家兔、大鼠或豚鼠），迅速放血，取出肝臟，在玻璃皿上剪成碎糜。
取50毫升錐形瓶 2個，各加入 3毫升 Locke氏溶液和 2毫升 PH7．6的磷酸緩沖浪。在一個錐形瓶中，加入3毫升0.2N丁酸溶液，另一個錐形瓶作為對照。取約0.5克肝組織兩份（相等重量），分別置于兩個錐形瓶內。混勻，于37℃恒溫水浴內保溫。
保溫2小時后，取出錐形瓶，各加入2毫升15%三氯乙酸溶液，在對照瓶內追加3毫升0.2N 丁酸溶液。混勻，靜置 15分鐘后過濾。分別吸取 5毫升濾波，放入另外兩個錐形瓶中，再各加5毫升0．IN碘溶液和5毫升10%氫氧化鈉溶液。搖勻后，靜置10分鐘。加入5毫升10%鹽酸溶液中和。然后，用0.1N硫代硫酸鈉溶液滴定剩余的碘。滴至淺黃色時，加入3滴淀粉溶液作指示劑。搖勻，并繼續滴到藍色消失。記錄滴定樣品與對照所用的硫代硫酸鈉的毫升教，并按下式計算樣品中丙酮含量：

式和B為滴定對照實驗所消耗的0.1N硫代硫酸鈉溶液毫升教；A為滴定樣品所消耗的0.1N硫代硫酸鈉溶液毫升數：0.9667為1毫升0.1N硫代硫酸鈉溶液所相當的丙酮毫克數。
試劑和器材
一、試劑
（1）動物：家兔、大白鼠等。肝糜必須新鮮，放置久則失去氧化脂肪酸能力。
（2）Locke氏溶液：取 0.9克氯化鈉、0.042克氯化鉀、0.024克氯化鈣、 0.015克碳酸氫鈉及0.1克葡萄糖，溶于水中，稀釋到100毫升。
（3）0.1N碘溶液：稱取12.7克碘和約25克碘化鉀，溶于水中，稀釋到1000毫升，混勻，用標準硫代硫酸鈉溶液標定。
（4）PH7.6，1/15的磷酸緩沖液。
（5）0.2N丁酸溶液：取18毫升正丁酸，用1N氫氧化鈉溶液中和PH=7.6，并稀釋至1000毫升。
（6）15%三氯乙酸溶液。 （7）10%氫氧化鈉溶液。
（8）10%鹽酸溶液 〔9〕0.1N硫代硫酸鈉溶液
二、器材
（1）玻璃皿 （2）錐形瓶（50毫升）
（3）試管及試管架 （4）吸量管（2、5毫升）
（5）漏斗 （6）微量滴定管（5毫升）
（7）剪刀及鑷子 （8）小臺稱。
（9）恒溫水浴