腦脊液的化學檢驗（一）

一、蛋白質定性檢查（潘氏球蛋白定性試驗）

1、潘氏球蛋白定性試驗原理  腦脊液中蛋白質主要是球蛋白與苯酚結合，可形成不溶性蛋白鹽而下沉，產生白色混濁或沉淀。

2、試劑  

    5%苯酚溶液：取純苯酚25ml，加蒸餾水至500 ml，用力振搖，放置37℃溫箱內1~2天，待完全溶解后，置棕色瓶內保存。

飽和苯溶液：取苯酚10 ml，加蒸餾水至100 ml，充分混勻，置入37℃溫箱中數小時，見底層有酚析出，上層即為飽和酚溶液。避光保存，一般置棕色瓶內保存。

3、操作  取試劑2~3 ml，置于小試管中，用毛細滴管滴入腦脊液1~2滴，在黑色背景下立即觀察結果。

4、結果判斷

    陰性（－）：無混濁，清晰透明，不顯霧狀。

    極弱陽性（±）：微呈白霧狀，對光不易看到，在黑色背景下才能看到。

    弱陽性（+）：呈灰白色白霧狀。

陽性（++）：呈白色薄云霧狀混濁。

強陽性（+++）：呈白色絮狀沉淀或白色濃云塊狀。

最強陽性（++++）：立即形成白色凝塊。

5、方法學評價  潘氏（Pandy）試驗所需標本量少，操作簡單，結果觀察較為明確，臨床試驗室常用此法。但該方法過于敏感，有一部分正常人也可出現極弱陽性（±）結果。

6、注意事項  

（1）紅細胞過多時，須先離心使細胞沉淀，吸取上清液進行試驗。

（2）試驗中所用試管應十分潔凈，否則易出現假陽性結果。

（3）所用試劑苯酚如不純，亦可引起假陽性反應；室溫低于10℃，酚飽和度低，亦可引起假陽性結果。

7、正常參考值  正常腦脊液中蛋白質含量僅是血漿蛋白的1/200，即0.2~0.4g/L，其成分以白蛋白為主，故蛋白定性試驗結果為陰性或極弱陽性（±）。

8、臨床意義  有腦組織和腦膜疾患時常呈陽性反應，如化膿性腦膜炎、結核性腦膜炎、梅毒性中樞神經系統疾病、脊髓灰白質炎、流行性腦炎等。腦出血時多呈強陽性反應，如外傷性血液混入腦脊液中，亦可呈陽性反應。

二、總蛋白定量測定

腦脊液蛋白定量測定可參照尿液蛋白定量，常用的方法為雙縮脲法和染料結合法。臨床檢驗多采用磺基水楊酸-硫酸鈉比濁法。

1、原理  磺基水楊酸為生物堿試劑，能沉淀蛋白質，但對白蛋白的沉淀能力比球蛋白強，加適量硫酸鈉后，沉淀白、球蛋白的能力趨于一致，與標準蛋白濁度對比進行定量測定。

2、試劑  磺基水楊酸-硫酸鈉試劑（SS-S）

         磺基水楊酸      3.0g

         無水硫酸鈉      7.0g

         蒸餾水          加至100ml

過濾后，儲存于棕色瓶中，如顯色或混濁則不能用。

3、方法  

（1）制備標準曲線  含蛋白200、400、800、1200、1600mg/L的稀釋混合人血清標準系列各0.5 ml，加SS-S試劑4.5 ml，充分混勻，7~15分鐘后，用420nm波長比濁，以吸光度為縱坐標，蛋白質濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

（2）樣品檢測  取待測腦脊液標本各0.5 ml于兩只試管中，其中一只試

管加SS-S試劑4.5 ml，另一試管加154mmol/L的NaCl溶液4.5 ml作為標本空白管。在與標準曲線相同的條件下比濁，所得得吸光度可從標準曲線上求得蛋白質濃度。

4、注意事項  

（1）腦脊液如有多量細胞或混濁，應先離心以除去。如蛋白質濃度過高，應先行用生理鹽水稀釋后重新測定。

（2）加入SS-S試劑的操作手法和速度、室溫及比濁前的放置時間都會影響實驗結果。故操作時應注意控制加入試劑的方式和比濁時間與標準管一致。應隨氣溫改變，勤作標準曲線。

5、正常參考值  

腰穿CSF蛋白含量：0.2~0.4g/L         池穿CSF蛋白含量：0.1~0.25 g/L

側腦室穿刺CSF蛋白含量：0.05~0.15 g/L

腦脊液蛋白質含量與年齡成正比，兒童含量較低，成人稍高，老年人又比成年人高。

6、臨床意義  腦脊液蛋白質含量增高，為血腦屏障被破壞的標志。頗受臨床工作者的重視。

蛋白質含量增高常見于下列情況：

（1）中樞神經系統炎癥。腦部感染時，腦膜和脈絡叢毛細血管通透性增加，蛋白質分子容易透過，首先是白蛋白增高，隨后是球蛋白和纖維蛋白增高。

（2）神經根病變。如急性感染性多發性神經炎（Guillain-Barre綜合征），多數病例有蛋白質增高，而細胞數正常或接近正常，即蛋白-細胞分離現象。

（3）椎管內梗阻。腦與蛛網膜下腔互不相通，血漿蛋白由脊髓中的靜脈滲出，CSF蛋白質含量顯著增高，有時高達30~50g/L，這時CSF變黃，可自行凝固。如脊髓腫瘤、轉移癌、粘連性蛛網膜炎等。此外，早產兒CSF蛋白含量可達2 g/L，新生兒為0.8~1.0 g/L，出生兩個月后逐漸降至正常水平。

含血的CSF蛋白質含量增高。為了鑒別原來有無蛋白質增高，可用每升紅細胞700×10⁶個約相當增加蛋白質量0.01 g/L來推算，用含血CSF的蛋白質含量減去含紅細胞數折算成的蛋白質含量，即為原來CSF的蛋白質含量。