脫水合成培養基配制與使用

1. 一般要求

正確制備培養基是微生物檢驗的最基礎步驟之一，使用脫水培養基和其他成分，尤其是含有有毒物質（如膽鹽或其他選擇劑）的成分時，應遵守良好實驗室規范和生產廠商提供的使用說明。培養基的不正確制備會導致培養基出現質量問題，如含瓊脂培養基不凝固、ph不在要求范圍、滅菌后顏色變深等。

使用商品化脫水合成培養基制備培養基時，應嚴格按照廠商提供的使用說明配制。如重量（體積）、pH、制備日期、滅菌條件和操作步驟等。 實驗室使用各種基礎成分制備培養基時，應按照配方準確配制，并記錄相關信息，如：培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、制造商、批號、pH、培養基體積（分裝體積）、無菌措施（包括實施的方式、溫度及時間）、配置日期、人員等，以便溯源。

2. 水

實驗用水的電導率在25℃時不應超過25 μS/cm(相當于電阻率≥0.4 ΜΩcm)，除非另有規定要求。 水的微生物污染不應超過103 CFU/mL。應按GB 4789.2，采用平板計數瓊脂培養基，在36 ℃±1 ℃培養48 h±2 h進行定期檢查微生物污染。

3.培養基稱重和溶解

小心稱量所需量的脫水合成培養基（必要時佩戴kou罩或在通風柜中操作，以防吸入含有有毒物質的培養基粉末），先加入適量的水，充分混合（注意避免培養基結塊），然后加水至所需的量后適當加熱，并重復或連續攪拌使其快速分散，必要時應完全溶解。含瓊脂的培養基在加熱前應浸泡幾分鐘。

4. 培養基pH 的測定和調整

用pH計測pH，必要時在滅菌前進行調整，除特殊說明外，培養基滅菌后冷卻至25 ℃時，pH應在標準pH±0.2范圍內。一般使用濃度約為40 g/L（約1 mol/L）的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5 g/L（約1 mol/L）的鹽酸溶液調整培養基的pH。如需滅菌后進行調整，則使用滅菌或除菌的溶液。

5. 培養基分裝

將配好的培養基分裝到適當的容器中，容器的體積應比培養基體積最少大20%。

6. 培養基滅菌

培養基應采用濕熱滅菌法或過濾除菌法。某些培養基不能或不需要高壓滅菌，可采用煮沸滅菌，如SC肉湯等特定的培養基中含有對光和熱敏感的物質，煮沸后應迅速冷卻，避光保存；有些試劑則不需滅菌，可直接使用。

濕熱滅菌在高壓鍋或培養基制備器中進行，高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15min，具體培養基按食品微生物學檢驗標準中的規定進行滅菌。培養基體積不應超過1000mL，否則滅菌時可能會造成過度加熱。所有的操作應按照標準或使用說明的規定進行。滅菌效果的控制是關鍵問題。加熱后采用適當的方式冷卻，以防加熱過度。這對于大容量和敏感培養基十分重要，例如含有煌綠的培養基。培養基十分重要，例如含有煌綠的培養基。

過濾除菌可在真空或加壓的條件下進行。使用孔徑為0.2 μm的無菌設備和濾膜。消毒過濾設備的 各個部分或使用預先消毒的設備。一些濾膜上附著有蛋白質或其他物質（如抗生素），為了達到有效過濾，應事先將濾膜用無菌水潤濕。

檢查 對經濕熱滅菌或過濾除菌的培養基進行檢查，尤其要對pH、色澤、滅菌效果和均勻度等指標進行檢查。

7. 培養基的使用

7.1 瓊脂培養基的融化

將瓊脂培養基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高壓鍋中的層流蒸汽）使之融化。經過高壓的瓊脂培養基應盡量減少重新加熱時間，融化后避免過度加熱。融化后應短暫置于室溫中（如2 min）以避免玻璃瓶破碎。

融化后的培養基放入47℃～50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫(可根據實際培養基凝固溫度適當提高水浴鍋溫度)，直至使用，培養基達到47℃～50℃的時間與培養基的品種、體積、數量有關。融化后的培養基應盡快使用，放置時間一般不應超過4 h。未用完的培養基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養基尤應注意，融化后保溫時間應盡量縮短，如有特定要求可參考zhi定的標準。傾注到樣品中的瓊脂培養基溫度應控制在約45℃左右。

7.2 培養基的脫氧

必要時，將培養基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15 min；加熱時松開容器的蓋子；加熱后蓋緊，并迅速冷卻至使用溫度（如FT培養基）。

7.3 添加成分的加入

對熱不穩定的添加成分應在培養基冷卻至47℃～50℃時再加入。無菌的添加成分在加入前應先放置到室溫，避免冷的液體造成瓊脂凝結或形成片狀物。將加入添加成分的培養基緩慢充分混勻，盡快分裝到待用的容器中。

7.4 平板的制備和儲存

傾注融化的培養基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少為3 mm（直徑90mm的平皿，通常要加入18mL～20mL瓊脂培養基）。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板需儲存，或者培養時間超過48h或培養溫度高于40℃，則需要傾注更多的培養基。凝固后的培養基應立即使用或存放于暗處和（或）5℃±3℃冰箱的密封袋中，以防止培養基成分的改變。在平板底部或側邊做好標記，標記的內容包括名稱、制備日期和（或）有效期。也可使用適宜的培養基編碼系統進行標記。

將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產生，平板應冷卻后再裝入袋中。儲存前不要對培養基表面進行干燥處理。對于采用表面接種形式培養的固體培養基，應先對瓊脂表面進行干燥：揭開平皿蓋，將平板倒扣于烘箱或培養箱中（溫度設為25℃～50℃）；或放在有對流的無菌凈化臺中，直到培養基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥。商品化的平板瓊脂培養基應按照廠商提供的說明使用。

8. 培養基的棄置

所有污染和未使用的培養基的棄置應采用安全的方式，并且要符合相關法律法規的規定。