羥鈷胺素照紫外可見分光光度法(通則0401)測定。避光操作。供試品溶液取鑒別(1)項下的溶液測定法取供試品溶液,在460nm與352nm波長處分別測定吸光度。限度460mm與352nm波長處的吸光度比值應不低于0.90有關物質照高效液相色譜法(通則0512)測定。避光操作供試品溶液取本品約25mg,精密稱定,置25ml量瓶中,加水適量,超聲處理使溶解并稀釋至刻度,搖勻。對照溶液精密量取供試品溶液1ml,置100m量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以0.o5mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調節pH值至3.2)-乙腈(85:15)為流動相;柱溫為35℃;檢測波長為260nm;進樣體積10pl。系統適用性要求理論板數按腺苷鈷胺峰計算不低于1500,腺苷鈷胺峰與相鄰雜質峰之間的分離度應符合要求。測定法精密量取供試品溶液與對照溶液,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍限度供試品溶液色譜圖中如有雜質峰,各雜質峰面積之和不得大于對照溶液的主峰面積(1.0%)。干燥失重取本品約0.10g,置五氧化二磷干燥器內,在60℃減壓干燥至恒重,減失重量不得過12.0%(通則0831)。