自身免疫性溶血性貧血（autoimune hemolytic anemi, AIHA）為自身抗體引起紅細胞破壞的一種溶血性貧血。AIHA患者在多次輸血免疫刺激后, 可產生同種免疫性抗體, 此類抗體由于患者體內同時存在的自身抗體的掩蓋作用而不易被發現。研究AIHA患者自身抗體的類型及其血型同種抗體的特異性, 對確保輸血安全有重要的臨床意義。我們采用抗人球蛋白試驗和吸收放散試驗, 對54例AIHA患者自身抗體的類型及同種抗體的特異性進行了鑒定, 選擇不含相應抗原及交叉配血試驗相合的血液進行輸注, 避免了溶血性輸血反應的發生。
1 材料和方法
1.1 材料 抗A、 抗B、 抗D、 抗C、 抗c、 抗E、 抗e、 廣譜抗人球蛋白血清、 抗人IgG血清、 抗人C3血清、 抗體篩選細胞（Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ號）及抗體特異性鑒定譜細胞（1～10號）均購自上海市血液中心; 凝聚胺試劑盒購自臺灣貝索公司; 微柱凝膠卡及其配套設備購自瑞士達亞美公司; 磷酸氯奎、 乙醚（分析純）系西安化學試劑廠生產; ABO血型反定型試劑紅細胞系3名獻血員的血液洗滌后混合而成, 由第四軍醫大學唐都醫院輸血科制備。在第四軍醫大學唐都醫院就診的AIHA患者54例(男20例, 女34例, 年齡10～58歲), 均經抗人球蛋白試驗及結合臨床表現確診。
1.2 方法
1.2.1 抗人球蛋白試驗 抽取患者靜脈血6 mL（ACD保存液抗凝）, 2 000 r/min離心10 min, 分離血清與紅細胞, 紅細胞用生理鹽水洗滌3次, 配成30 mL/L的紅細胞懸液備用。（1）直接抗人球蛋白試驗（Direct antiglobulin test, DAT）: 取30 mL/L的紅細胞懸液1滴加入試管中, 再加入抗人球蛋白血清1滴, 搖勻3 000 r/min離心15 s觀察結果, 若為陽性, 再用抗IgG和抗C3抗體進行分型; （2）間接抗人球蛋白試驗（Indirect antiglobulin test, IAT）: 取患者血清（或血漿）2滴加入試管中, 再加入30 mL/L O型RhD陽性紅細胞懸液1滴, 搖勻放37℃水浴30 min, 用生理鹽水洗滌3次, 加入抗人球蛋白血清1滴, 3 000 r/min離心15 s觀察結果, 陰、 陽性對照參照文獻［1］。
1.2.2 同種抗體檢測 （1）氯奎放散試驗: 將AIHA患者DAT為陽性的紅細胞, 用生理鹽水洗滌3次, 取壓積紅細胞0.2 mL, 加入200 mL/L氯奎生理鹽水溶液0.8 mL, 在37℃水浴震搖5 min, 再用生理鹽水洗滌3次, 取1滴配成50 mL/L 的懸液作DAT, 乙醚放散試驗參照文獻［2］。（2）自身溫抗體吸收試驗: 將IAT陽性患者的紅細胞用37℃生理鹽水洗滌3次, 取1 mL壓積紅細胞, 加10 mL/L菠蘿酶1 mL, 混勻1 000 r/min離心洗滌3次, 將壓積紅細胞分成2等份, 1份壓積紅細胞加2 mL患者血清, 混合放37℃水浴30 min, 1 000 r/min 離心2 min, 將血清移到第2份壓積紅細胞中, 混勻放37℃水浴30 min, 1 000 r/min離心2 min, 吸出自身紅細胞吸收后的血清, 用IAT進行同種抗體的檢測與特異性鑒定。
1.2.3 ABO、 RhD血型鑒定與交叉配血試驗 對血型鑒定困難及交叉配血試驗不合的患者血液標本, 采用經吸收放散后的血清及紅細胞進行血型鑒定與交叉配血試驗。ABO血型鑒定采用鹽水法進行正反定型; 疑難ABO、 Rh血型鑒定及交叉配血試驗采用微柱凝膠法（microtubes gel technology, MGT）及手工凝聚胺法（manual polybrene test, MPT）進行檢測［3］。
2 結果
2.1 抗人球蛋白試驗 54例AIHA患者的DAT和IAT均顯示陽性反應, 凝集強度DAT ～, IAT ～。將患者紅細胞檢測結果（即DAT陽性）分為3組: (1)廣譜抗人球蛋白組; (2)抗IgG組; (3)抗C3組。(1)、 (2)組抗人球蛋白試驗陽性為IgG型; (1)、 (3)組陽性為C3型; (1)、 (2)、 (3)組均陽性為IgG+C3型（表1）。
2.2 ABO、 RhD血型鑒定及交叉配血試驗 患者原血清及未洗滌紅細胞, ABO血型鑒定正反定型不符、 交叉配血試驗不合及抗體篩選陽性者54例, RhD定型均為陽性, Rh血型其他抗原誤定者10例; 吸收后的血清及洗滌后的紅細胞, ABO血型正反定型相符、 交叉配血試驗相合及抗體篩查陰性者50例。同時將AIHA患者原血清及自身紅細胞吸收后的血清進行自身抗體和同種抗體的檢測, 結果所有原血清與抗體篩查細胞在鹽水法、 IAT、 MPT及MGT法中均發生凝集反應; 而經患者自身紅細胞吸收后的血清有50例與抗體篩查細胞不再發生凝集反應, 有4例患者血清仍與抗體篩查細胞發生凝集反應(表2)。
表1 54例AIHA患者抗體類型的分布（略）
表2 54例AIHA患者血清吸收前后與抗體篩查細胞反應結果（略）
*受檢血清與譜細胞均呈非特異性凝集反應.
2.3 同種抗體的特異性鑒定 采用譜細胞對仍與抗體篩查細胞發生凝集反應的患者血清, 分別在4℃、 22℃及37℃用鹽水法、 抗人球蛋白試驗、 MPT及MGT法進行抗體特異性的鑒定。結果檢出抗C抗體1例（與CCDee細胞凝集, 與ccDEE細胞不凝集）, 抗E抗體2例（與ccDEE細胞凝集, 與Ccdee細胞不凝集）, 抗e抗體1例（與ccEee及ccdee細胞凝集, 與CcDEE細胞不凝集）, 從而證實了患者血清中存在具有Rh血型特異性的同種抗體。根據患者Rh血型及自身抗體的血型特異性, 選擇相容或交叉配血試驗相合的洗滌紅細胞懸液輸注后, 檢測結果顯示患者血紅蛋白上升, 未發生溶血性輸血反應。
3 討論
本研究在對75例疑似AIHA患者的檢測中,
發現抗人球蛋白試驗陽性者54例, 女性的陽性率(62.96%)高于男性（37.04%）。抗體類型以IgG＋C3型最多（62.96%）,
其次為IgG型（20.37%）及C3型（16.67%）。IgG＋C3型的臨床癥狀、 溶血及貧血程度均較嚴重, 發生溶血危象者較多, 而IgG型、
C3型者貧血及臨床癥狀較輕。AIHA患者因體內免疫系統功能的紊亂, 除產生自身抗體而引起溶血性貧血以外,
還可對輸入血型不相合的紅細胞產生同種免疫性抗體, 本組檢出具有Rh特異性的同種抗體4例。因此, 對AIHA患者尤其是有妊娠史和輸血史的患者,
在輸血前進行同種抗體的檢測具有非常重要的臨床意義。由于AIHA患者存在自身抗體的干擾,
難以檢測或排除血清中同種抗體的存在。目前檢測同種抗體的最好方法, 是應用酶處理細胞或用患者自身紅細胞對自身血清作抗體吸收, 排除自身抗體的干擾,
然后再用譜細胞對吸收后的血清進行抗體檢測, 90％以上的AIHA病例可檢出同種抗體［2］。
AIHA患者因血清中存在自身抗體,
而且部分患者還同時存在同種抗體, 因自身抗體能凝集患者及他人紅細胞而導致ABO血型尤其是Rh血型鑒定困難［4］,
同時又能干擾對同種抗體的檢測, 要為這些患者找到完全相配合的血液是相當困難的,
極易造成誤輸異型血而發生溶血性輸血反應。因此AIHA患者能不輸血者盡可能不輸血, 采用激素與免疫抑制劑治療,
大多數患者可獲得良好的效果。對出現溶血危象而必須輸血的患者, 如果無輸血史或生育史, 選擇輸入交叉配血試驗凝集強度最弱的供血者的洗滌紅細胞懸液,
或根據自身抗體顯示出的Rh等相關特異性, 輸注缺乏相應抗原的血液是較為安全的。但AIHA患者如果有輸血史或生育史,
則應在輸血前進行同種抗體的檢測并鑒定其特異性, 如發現有臨床意義的同種抗體則必須選擇與同種抗體相容的洗滌紅細胞懸液進行輸注,
才能確保輸血治療的安全和有效。
【參考文獻】
［1］ 楊世明, 張勇萍, 杜潤家, 等. 微柱凝膠抗人球蛋白法檢測IgG抗體的實驗研究與應用［J］. 臨床血液學雜志（輸血與檢驗版）, 2007, 4（1）: 21-24.
［2］ 肖星甫. 輸血技術手冊［M］. 成都: 四川省科學技術出版社, 1992: 89-98.
［3］ 楊世明, 張勇萍, 潘曉莉. 冷凝集素綜合征的血清學特性及檢測方法探討［J］. 細胞與分子免疫學雜志, 2006, 22（4）: 541-543.
［4］ 張魯平, 李繼明, 劉雯馨. 自身免疫性溶血性貧血引起血型及配血困難2例［J］. 臨床血液學雜志（輸血與檢驗版）, 2007, 4（2）: 95-96.