自身免疫性疾病新型自身抗體研究進展

　　自身免疫性疾病（autoimmune disease, AID）是指機體免疫系統對自身成分的免疫耐受被打破, 從而攻擊自身的器官、組織或細胞, 引起損傷而誘發的一類疾病。按受累器官組織的范圍將AID分為器官特異性AID和非器官特異性AID兩大類。器官特異性AID是指病變局限于某一特定器官或組織, 如多發性硬化癥、自身免疫性肝病、l型糖尿病等。非器官特異性AID是指侵犯多種組織器官或系統的一組疾病, 包括系統性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus, SLE）、類風濕關節炎（rheumatoid arthritis, RA）、干燥綜合征（Sj? gren's syndrome, SS）、多發性肌炎/皮肌炎等。自身抗體是診斷AID的重要依據, 每種AID都具有其特征性的自身抗體譜[1], 這些自身抗體是早期AID診斷必不可少的生物學指標。近年來, 相關自身抗體的研究進展較快, 本文就部分常見的非器官特異性AID的相關自身抗體的研究進展作一綜述。

　　1 SLE

　　 SLE是一種侵犯多系統、多器官的AID, 其發病是免疫系統多種異常變化的結果。經典的自身抗體早已應用于臨床的檢測, 如抗核抗體（antinuclear antibody, ANA）、抗雙鏈DNA（double stranded DNA, dsDNA）抗體、抗組蛋白抗體、抗核小體抗體、抗Sm抗體、抗U1核糖核蛋白抗體等。最近的研究又發現了一些新型抗體與SLE的發生、發展有關。

　　1.1 抗細胞膜DNA（cell membrane DNA, cmDNA）抗體

　　 雖然絕大部分具有抗原性質的DNA存在于細胞核內, 但有證據表明細胞膜上存在另外一種形式的具有抗原特性的DNA。這種DNA分子可以在人B淋巴細胞、單核細胞和外周血白細胞膜上表達, 不同于細胞核內的DNA, 是一種線性雙鏈DNA分子, 有17 000個堿基對, 細胞膜上相對分子質量為30 000的蛋白質可能為其受體, 稱為cmDNA受體。SLE患者存在cmDNA受體功能障礙, 使cmDNA不能被正常清除, cmDNA分子作為一種獨特的靶抗原, 誘導SLE患者產生抗cmDNA抗體。茹晉麗等[2]以人B淋巴細胞株Raji、人早幼粒白血病細胞株HL60為底物, 研究抗cmDNA抗體在SLE中的臨床價值, 發現抗cmDNA抗體診斷SLE的敏感性高、特異性強, 可能成為診斷SLE的相對特異的抗體之一, 而且抗cmDNA抗體的敏感性和特異性在2種細胞株之間差異無統計學意義, 陽性預測值和陰性預測值差異亦無統計學意義。因為Raji細胞株較HL60細胞株更易復蘇、熒光圖形亮度更強, 表達效果更好, 且價格便宜, 所以選擇Raji細胞株為底物檢測抗cmDNA抗體較HL60細胞株更有優勢, 可以在臨床工作中推廣使用。

　　1.2 抗N-甲基-D-天冬氨酸受體（N-methyl-D-aspartic acid receptor, NMDA）抗體

　　 抗NMDA抗體是針對NMDA受體的一種抗體。NMDA是一種中樞谷氨酸鹽興奮性受體, 在整個腦神經細胞均有表達, 并對神經突觸形成、神經元發育、神經細胞移行等發揮重要作用。抗NMDA抗體透過血腦屏障與NMDA結合后, 可引起神經元凋亡, 進而出現中樞神經系統異常。YOSHIO等用肽抗原（DWEYSVWLSN）作為抗原, 預實驗中強陽性患者的血清作為陽性對照, 測定了80例SLE患者血清、腦脊液抗NMDA抗體水平, 結果發現神經精神狼瘡（neuropsychiatric systemic lupus erythematosus, NPSLE）患者抗NMDA抗體水平顯著高于非NPSLE患者, 尤其是彌漫性神經精神功能障礙的患者, 其腦脊液抗NMDA抗體水平明顯升高。YANG等研究分析了107例SLE患者, 發現NPSLE患者抗NMDA 2A（NR2A）抗體水平明顯升高, 而NR2A是NMDA的一個重要亞單位, 伴有癲癇的NPSLE患者抗NR2A抗體水平高于不伴有癲癇的患者, 因而認為抗NR2A抗體在NPSLE伴癲癇發作的患者中參與了關鍵的發病過程。

　　2 RA

　　 RA以關節和關節組織非化膿性炎癥為主要特征, 主要表現為關節滑膜炎, 最終是關節的軟骨、韌帶、肌健等各種組織以及多器官的損害。目前, 臨床診斷RA的自身抗體指標常用的有類風濕因子（rheumatoid factor, RF）、抗角蛋白抗體（anti-keratin antibody, AKA）、抗環瓜氨酸肽（cyclic citrullinated peptide, CCP）抗體、抗體葡萄糖-6-磷酸異構酶（glucose-6-phosphate isomerase, GPI）抗體等。近年來, 國內外對RA自身抗體的研究又取得一些新的進展。

　　2.1 抗核周因子（anti-perinuclear factor, APF）抗體

　　 APF抗體的抗原主要為存在于人頰黏膜上皮細胞胞漿內的一種不溶性蛋白質, 抗體有IgG、IgA、IgM 3種類型, 以IgG為主。ABEDIAN等發現, APF抗體可在RA早期出現, 但檢出率與病程長短無相關性, 對RA診斷具有較好的敏感性（71.2%）和特異性（94.3%）, 是有價值的診斷和鑒別診斷RA的血清學工具。還有研究發現, APF抗體陽性與RA病情活動性指標, 如晨僵時間、握力、Ritchie指數、紅細胞沉降率、C反應蛋白呈正相關。APF抗體、AKA、RF同時檢測, 2種以上抗體陽性的RA患者骨破壞更嚴重, 3種抗體均陽性較抗體均陰性的RA患者關節外表現更多, 炎癥反應更嚴重。

　　2.2 抗RA33抗體

　　 抗RA33抗體是1989年由Hassfeld用免疫印跡法在RA患者血清中發現的一種自身抗體。因與相對分子質量33 000的核酸蛋白發生反應, 故稱為抗RA33抗體。抗RA33抗體對RA診斷的敏感性國內外報道不一, 大多介于20%~40%之間[7]。因這種抗體與RF沒有交叉反應, 還可出現于疾病的不同時期, 特別是在RF檢測陰性的時候, 有利于不典型和早期RA的診斷。裴春紅等對64例RA患者的抗CCP抗體、AKA、抗RA33抗體3種抗體聯合檢測, 發現聯合檢測的敏感性為39.1%、特異性為93.8%, 單獨抗RA33抗體檢測的敏感性為42.2%、特異性為81.2%。而最近有研究提出了不同的觀點, AL-MUGHALES通過研究認為, 與傳統的RF、抗CCP抗體和C反應蛋白相比, 抗RA33抗體并未顯示出其獨有的診斷優勢, 而只是在RA早期稍有升高。可見抗RA33抗體在聯合檢測時才有更顯著的臨床意義。

　　2.3 抗突變型瓜氨酸波形蛋白（mutated citrullinated vimentin, MCV）抗體

　　 抗MCV抗體與抗CCP抗體在化學結構上具有相似性, 其主要針對的是Sa抗原, 曾被認作抗Sa抗體。Sa抗原是存在于人脾、胎盤、RA患者血管滑膜翳的一種非核抗原, 在凋亡的巨噬細胞中波形蛋白被瓜氨酸化, 以波形纖維蛋白為載體, 瓜氨酸為半抗原。隨后的研究表明, Sa抗原就是MCV。RENGER等研究認為抗MCV抗體對疑似RA的患者具有篩查作用。SIZOVA研究稱抗MCV抗體的滴度水平與RA常見的臨床指標、影像學指標、關節破壞的個數、患者生活質量得分沒有相關性, 但與關節炎活動度和紅細胞沉降率相關。ZAHRAN等[13]研究也發現抗MCV抗體可以與C反應蛋白紅細胞沉降率一起用來監測RA的活動度, 提示RA病情活動。

　　2.4 抗聚絲蛋白抗體（anti-filaggrin antibody, AFA）

　　 法國學者Simon等于1993年從正常人乳房表皮中成功提取了聚絲蛋白, 并應用免疫印跡法在RA患者血清中檢出AFA。現有研究表明, AFA是RA自身IgG抗體, 診斷RA的特異性高達95%, 也是病情進展的標志物之一, 可能參與RA發病過程中的抗原交叉反應。AFA是近年來用于診斷RA的新型抗體, 一方面其對RA的早期診斷具有良好的特異性； 另一方面, AFA的滴度與RA病情和預后有一定的相關性。

　　2.5 抗氨基甲酰化蛋白（carbamylated protein, CarP）抗體

　　 近年來, 針對翻譯后修飾抗原產生的自身抗體的發現成為尋找新的RA診斷指標的突破口。氨基甲酰化作為一種較新的翻譯后修飾, 其及抗CarP抗體與RA的關系也逐漸引起人們的關注。SHI等建立了RA組和健康對照組進行比較, 發現在RA組中, 45%的RA患者抗CarP IgG型抗體陽性, 43%的RA患者抗CarP IgA型抗體陽性, 而在健康對照組中幾乎檢測不到該抗體。由此可見, 抗CarP抗體是存在于已經確診的RA患者血清中的自身抗體, 并且很有可能參與RA的病程進展。此外, 還有研究發現抗CarP抗體也是一種良好的RA后關節受損的預測標志物。

　　3 SS

　　 SS是一種較為常見的以外分泌腺淋巴細胞浸潤為特征的AID。常侵犯口眼分泌腺, 也可累及皮膚、肺、肝、腎、神經及血管等全身各個系統。目前SS患者血清中可以檢測到多種非特異性自身抗體, 已經明確抗Ro/SSA抗體和抗La/SSB抗體對SS有診斷意義。

　　3.1 抗毒蕈堿乙酰膽堿3受體抗體

　　 抗毒蕈堿乙酰膽堿3受體抗體是一種在SS患者血清中發現的新型自身抗體, 可以阻斷乙酰膽堿能神經信號的有效傳遞, 引起腺上皮細胞的分泌功能低下, 可能與SS發病有關。KAJIYA等報道, 在原發性SS患者中, 抗毒蕈堿乙酰膽堿3受體抗體定向攻擊毒蕈堿乙酰膽堿受體, 抑制類膽堿神經纖維突觸后的傳遞, 導致副交感神經功能障礙。羅慧臣等研究發現, 在SS患者唇腺各部位毒蕈堿乙酰膽堿3受體和水通道蛋白5的表達量不同, 提示毒蕈堿乙酰膽堿3受體可能參與SS口干的發病, 因此抗毒蕈堿乙酰膽堿3受體抗體檢測在SS診斷中具有重要的參考價值。

　　3.2 抗SP1抗體

　　 SP1是一種主要在唾液腺中表達的蛋白, 動物實驗證明小鼠各組織中以下頜下腺及淚腺的SP1表達水平最高。SHEN等發現在轉基因白細胞介素14α 的SS小鼠模型早期可以檢測到抗SP1抗體, 指出唇腺組織活檢病理中淋巴灶多的動物組抗SP1抗體的陽性率低于無淋巴灶或淋巴灶少的動物組, 提示抗SP1抗體可能在SS動物模型早期階段就已存在。隨后有學者對美國及希臘SS患者血清抗SP1抗體進行了檢測, 發現SS患者該抗體的陽性率明顯高于RA患者和無口干眼干的健康人, 并指出抗SP1抗體對抗SSA抗體和抗SSB抗體陰性的SS有一定的診斷意義。

　　3.3 抗α -胞襯蛋白抗體

　　 日本學者Haneji等于1997年首次在原發性SS動物模型中提取出一種相對分子質量為120 000的自身抗原, 其氨基末端殘基與人類細胞的骨架蛋白α -胞襯蛋白相同。初步證實α -胞襯蛋白免疫反應可能在SS初始發展過程中起了非常重要的作用。國外有學者檢測了SS抗α -胞襯蛋白抗體, 顯示該抗體的特異性高達93%, 并發現抗α -胞襯蛋白抗體與RF陽性、高球蛋白血癥等相關。國內有學者對抗α -胞襯蛋白抗體在SS中的作用進行了研究, 發現抗α -胞襯蛋白抗體的陽性率近80%, 如聯合抗SSA/SSB抗體、抗毒蕈堿乙酰膽堿3受體抗體等檢測, 可使SS診斷的敏感性升高至88.2%。但也有研究持反對觀點, 認為抗SSA/SSB抗體較抗α -胞襯蛋白抗體有更好的敏感性, 且抗SSA抗體的特異性也較抗α -胞襯蛋白抗體好。另一項研究結果顯示, 抗α -胞襯蛋白抗體在診斷SS時, 既不能作為敏感性抗體也不能作為特異性抗體。因此一般認為抗α -胞襯蛋白抗體陰性不能除外SS的診斷, 而抗α -胞襯蛋白抗體陽性可能有助于SS的診斷。

　　4 多發性肌炎/皮肌炎

　　 特發性炎癥性肌病（idiopathic inflammatory myopathy, IIM）是一組以炎癥性骨骼肌病變為特征的AID, 臨床上最常見的類型是多發性肌炎和皮肌炎。IIM患者血清中可檢出的自身抗體類型有肌炎特異性自身抗體和肌炎相關性自身抗體, 近年的研究發現, 這些自身抗體（最常用的是抗Jo-1抗體）及多種新型的自身抗體常與IIM的某些臨床表現密切相關。

　　4.1 抗染色質解旋酶DNA結合蛋白4（chromodomain-helicase-DNA-binding protein 4, CHD4）抗體

　　 抗CHD4抗體是肌炎特異性自身抗體中唯一與皮肌炎高度相關的自身抗體, 是一種對皮肌炎診斷較為特異的自身抗體。有研究發現, 抗CHD4抗體在多發性肌炎和皮肌炎中的陽性率分別為4.5%和26.1%, 在其他結締組織病患者和正常人中均未檢測到； 抗CHD4抗體對皮肌炎診斷的特異性為99.4%, 對皮肌炎而言, 該抗體陽性組多以皮膚損害為首發表現, 病程中多出現V型或圍巾型皮疹； 而該抗體陰性組常以肌肉癥狀首發, 病程中發熱多見。

　　4.2 抗信號識別顆粒（signal recognition particle, SRP）抗體

　　 抗SRP抗體是位于胞質中的核糖核蛋白復合物, 能識別分泌型和膜結合型蛋白并通過內質網調節蛋白轉位。抗SRP抗體陽性患者有獨特的臨床特征和組織病理學特點, 患者常以嚴重肌炎急性起病, 肌酶顯著升高, 對常規治療抵抗, 病死率較高。HAMAGUCHI等報道5%~10%的多發性肌炎和皮肌炎患者抗SRP抗體陽性, 而非肌炎患者（如硬皮病）也能檢測到抗SRP抗體, 但陽性率很低。

　　4.3 抗無肌炎性皮肌炎（clinically amyopathic dermatomyositis, CADM）-140抗體

　　 抗CADM-140抗體是存在于合并間質性肺炎的無肌炎性皮肌炎（amyopathic dermatomyositis, ADM）患者血清中的一類特殊抗體, 其所識別的抗原為黑色素瘤分化相關基因5（melanoma differentiation-associated gene 5, MDA5）, 故CADM-140抗體又稱為抗MDA5抗體。大多數抗CADM-140抗體陽性的ADM患者迅速進展為肺間質病變, 是皮肌炎和ADM患者中間質性肺炎特別是急進型間質性肺炎的標志性抗體。有研究報道, 抗CADM-140抗體在皮肌炎中的陽性率為26%, 在ADM中的陽性率為65%, 而且抗CADM-140抗體陽性的皮肌炎比陰性患者具有更多的肺間質病變。

　　4.4 抗p155/140抗體

　　 TARGOFF等的研究發現, 抗p155抗體與皮肌炎及腫瘤相關的皮肌炎相關, 在成人和兒童中均很常見。兒童皮肌炎不同于大部分肌炎, 其自身抗體出現的頻率較低, 而抗p155抗體在兒童皮肌炎中出現的頻率至少與成人皮肌炎相同。在成人和兒童中, 抗p155抗體在皮肌炎（29.4%, 48/163）中比在多發性肌炎（4.2%, 3/71）中更為常見, 抗p155抗體陽性患者患惡性腫瘤的比例為37.5%（6/16）, 占全部成年皮肌炎患者的11.8%（6/51）。

　　 綜上所述, AID的發病是在有特定遺傳背景的個體中, 由內外多種因素誘發, 多種免疫因素參與的一個多因素、多步驟的復雜過程。其發病機制尚未完全明確, 發病形式復雜多樣, 產生的自身抗體譜種類繁多而且相互交叉重疊, 各自的敏感性和特異性都不相同。這就需要進行更多的臨床研究和探索, 以期找到每一種AID獨特的敏感性和特異性都較高的自身抗體, 從而實現精確診斷、精準醫療, 造福患者。