液相溶劑瓶原裝蓋上有兩個小孔,一直擔心空氣當中的懸浮顆粒會落入瓶中,污染流動相,為了避免污染,又防止出現內外壓差,對溶劑瓶做了如下小改進。
一、大一點的孔用一次性針筒過濾頭堵上,另一小孔則先將一次性針筒過濾頭套入一個塑料槍頭再插入。
二、裝水相的和有機相的溶劑瓶,分別選用無機相的和有機相的一次性針筒過濾頭。
三、我曾經用空針筒套上過濾頭推拉空氣,測試無明顯阻力,用在溶劑瓶上應該不會產生內外壓差。
四、每三個月就更換一次,保證過濾空氣效果,改進兩年多來對液相運行無影響。
毛細管電泳法操作經驗
1 斷流的可能原因
a、有氣泡。解決辦法:所有進入毛細管的液體都要超聲排氣,特別是容易起氣泡的溶液,如SDS。
b、有沉淀物。解決辦法:所有進入毛細管的液體都要過濾,濾膜孔徑要比毛細管內徑小。
c、毛細管有裂口,最容易裂的地方是窗口處和毛細管出口端,有時候看不出來,因為加壓注水的時候仍能看到液滴出來,需要用手碰一碰才能發現。
2 基線漂移
a、毛細管沒活化好:需要用0.1 M氫氧化鈉多沖一沖
b、毛細管沒平衡好:沖完氫氧化鈉和水后需要用buffer再沖一段時間,這個時間得根據buffer的組成而定。必要時候需要跑空白一段時間。
c、燈接近壽命:查看燈的使用時間,如果已經兩千多個小時接近三千小時的話,可以考慮換燈了。
d、毛細管壽命已到。毛細管是有使用壽命的,要看怎么保養,當然,還跟使用的buffer有關。有些buffer特別傷管子的。
3 常見緩沖溶液的使用
緩沖溶液一般是先配好stock solution,使用的時候再進行稀釋。但是stock solution也不能長時間存放,0.1 M 的磷酸、硼砂等溶液常溫下一個星期就會有變化,再長時間可以看到有沉淀析出。但是也不能因此放到冰箱去,因為放到冰箱也會有沉淀析出,盡量常溫存放,然后每星期重配一次。另外,配置硼砂的時候要稍微加熱幫助溶解,不然溶解不了。但加熱也不要太猛烈,不然溶解效果也是不好。
4 sds使用注意事項
sds在配置過程中容易產生氣泡,所以如果用容量瓶來配置是不實際的。這時候就不能對sds的濃度做精確要求。所以,一般用量筒或者離心管配置就好了,加水的時候用玻棒引流,小心的攪拌,邊配置邊超聲促進溶解。
5 毛細管的使用和維護
避免用強堿溶液長時間沖洗,比如1 M氫氧化鈉,內壁會被腐蝕的。長時間不用的時候應該吹干,兩端密封保存。也有人建議用水封存。
6 UV燈的使用注意事項
不要暴力關電,要在操作界面按關燈鍵。一般不超過兩小時暫停檢測不需要關燈,因為開關燈都是會對燈造成損害的。
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