色譜柱孔徑選擇小知識

1.測量法和表示

　　孔徑分布和比表面積可以通過相同的方法來測量，如：氮吸附法和汞空隙率測定計平均孔徑也能通過逆向分子排阻法來測量，但真正的孔徑分布不能用個方法來測量。不過，因其它方法存在一些問題，高聚物填料仍然要采用逆向分子排阻法。孔徑用nm或埃做單位。孔徑分布的值是標稱的，而且不同生產商有不同的方法。所以，某生產商標稱10nm的可能與另一生產商標稱8nm或12nm的相同。

2.孔徑與保留

　　孔徑是填料物理性質的一個基本因子，并決定顆粒相比率（phase ratio）。進一步決定了填料的保留性質和載樣量。

3.孔徑和分子量

　　被分析物分子小隨分子量增加而增大。如果其分子量大小約為孔徑的三分之一或大，則傳質會嚴重受阻并造成低效能和峰展寬。這樣的情況下，要用更大孔徑的填料。對所有標準分析問題，通常用孔徑在大概6nm到13nm之間的填料。更大孔徑的填料也可以用在肽類分離上。分子量比肽更大的，如蛋白質，用30nm孔徑的填料更加合適。但這樣的填料與小分子作用的不好，因為比表面積減少了。對被分析物分子量小于3000的，應用孔徑小些的。被分析物分子量大于10000的，應用孔徑30nm的填料。分子量介于3000到10000的，大的小的都可以得到滿意結果。

4.孔徑分布

　　大HPLC填料的孔徑分布跨度有一個數量級。這樣的分布對大多數實用目的已經足夠的窄了。然而，微孔的減少時填料的性能提高了。這可能是有窄孔徑分布的填料如Waters Spherisorb的一個優勢。

5.非孔填料

　　非孔填料能用于高分子量的、在大孔徑填料中表現出擴散受限制的被分析物。但是，只能得到有限的比表面積。

6.選擇正確的孔徑

　　被分析物的分子量            推薦使用的填料孔徑

　　<3000                          6到13nm

　　3000到10000                    10nm

　　>10000（例如蛋白質）          30到100nm