不同的色譜柱有不同的測試方法,來自不同廠家的同類色譜柱也往往采用不同的測試條件,所以最好按照色譜柱說明書中的測試報告測定柱效。一般工作站的數據處理都有自動計算柱效的功能,若沒有工作站,可由公式計算:柱效(理論塔板數)等于保留時間與峰寬的比值的平方再乘以16,或保留時間與半峰寬之比值的平方再乘以5.54。
測定柱效時,不要接保護柱,同時注意連接的管路盡可能短,以減少死體積。
自己測定的柱效有時會低于出廠時測試報告給出的值,因為一般情況下,應用實驗室沒有專門用于測試柱效的儀器。當然,使用了一段時間的色譜柱的柱效是會下降的。
作為一個例子,下面給出Sepax的參考測試條件可用于C18(C8)柱效的測定。
流動相:乙腈/水(65:35)(v/v)
流速:1.0mL/min
檢測波長:254nm
測試樣品:Aniline(0.1%),Anisole(0.2%),Toluene(0.5%)(v/v)
進樣體積:2.0uL