苦參堿含量的HPLC測定法

本文采用HPLC法建立了苦參中苦參堿含量的檢測方法。實驗采用氨基色譜柱，以乙腈+磷酸二氫鈉（80+20）為流動相，檢測波長210nm，流速1ml/min，苦參堿在0.01~0.2μg范圍內具有良好線性范圍（R2=0.9991），RSD為0.45%（n=5）。采用HPLC法檢測苦參堿簡單、快速、準確，可用于質量控制。

苦參堿是豆科植物苦參干燥根的主要成分之一，其在中樞神經系統、心血管系統、殺蟲抗菌、抗炎、免疫及抗腫瘤等方面有重要的藥理活性。本文采用HPLC法對苦參中的苦參堿進行含量測定，方法簡單快速，適用于對苦參藥材的質量控制。

儀器與試劑

儀器

LabTech LC600二元梯度高效液相色譜系統

試劑

乙腈（色譜級）；磷酸二氫鈉（分析純）；去離子水；苦參堿標樣：已知含量99%。

實驗方法

提取方法

取苦參浸膏0.15g，加入堿性甲醇（氨水調甲醇pH值到9）5ml超聲提取30min，離心取上清液。再分別加入堿性甲醇2ml，超聲提取兩次，離心后合并提取液，過濾，用堿性甲醇定容至10ml，提取液待用。

液相色譜條件

色譜柱：氨基柱，250mm×4.6mm，5μm；流動相：乙腈+磷酸二氫鈉（0.02mol/L）=80+20(V/V)；流速：1ml/min；進樣量：20μl；紫外檢測器：210nm；柱溫：30℃。

標準溶液的配置

稱取苦參堿標準品0.05g（精確至0.0002g）,置于50ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。用流動相乙腈+磷酸二氫鈉（0.02mol/L）=80+20（V/V）稀釋濃度為0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml標準液，搖勻備用。

試樣溶液的配置

稱取約0.02g苦參的提取液，置于50ml容量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻。經0.45μm的針筒式微孔過濾膜過濾，濾液作為試樣待進行液相色譜測定。

結果

苦參堿標準品色譜圖如圖1所示。

苦參堿標準品標準曲線的制備：配置不同濃度標準品進HPLC檢測，繪制標準曲線，見圖2。標準品濃度分別為：0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml。按色譜條件測定，以峰面積對不同濃度進行回歸，得到回歸方程為Y=-1.056×104+3.027×104X，R2=0.9991。峰面積與苦參堿濃度呈良好的線性關系。

苦參堿試樣色譜圖見圖3，苦參堿試樣5次重復進樣，見表1。經計算，稀釋試樣中苦參堿的平均濃度為1.163μg/ml，見表1，重復性RSD為0.45%。計算得苦參提取液中苦參堿的濃度為2.717mg/g。

小結

本文采用HPLC法對苦參中的苦參堿進行含量測定，前處理方法簡單，苦參堿在0.01~0.2μg范圍內具有良好的線性范圍，回歸方程為Y=-1.056×104+3.027×104X，R2=0.9991，重復性良好，RSD=0.45%（n=5），苦參提取液濃度為2.717mg/g。HPLC法對苦參堿含量測定的方法準確、快速，可有效應用于苦參藥材的質量控制。