支持方案 2 用于染色體斷裂分析的吉姆薩染色
吉姆薩染色是一種組織學染色，對細胞核和染色體有特別的親和力。制作簡單，使未顯帶的細胞核和染色體成微紅色到紫色。
1.將一片 pH6.8 的 Gurrs 緩沖液溶于 1L 水中。
2.加入 4 ml 新鮮的吉姆薩染液至盛有 46 mlGunrs 緩沖液的染缸中。染液可使用 1h 或染 20 塊玻片，然后就要配置新的染液。
3.將中期染色體玻片染色 5 min。在盛有 Gurrs 緩沖液的染缸中浸洗幾次（第 1 步)。
4.在盛有水的染缸中浸洗幾次。空氣中干燥，檢查玻片的染色強度。
染色強度應該足量，而染色體上的裂痕和斷裂區又不易染色（非染色）。
5.使用 Permount 組織封固劑將蓋玻片加載于載玻片上。
備選方案 1 成纖維細胞培養二氧橋丁烷試驗
如果外周血不能獲取，可以通過皮膚組織活檢成纖維細胞培養來進行試驗。也可以從流產兒或死產兒中取幾小片肺組織或皮膚來進行試驗。因為較高濃度對 FA 成纖維細胞有太大的毒性，很難收獲足夠多的中期分裂相來進行研究。
1.將 0.5 ml DMEM 完全培養基/20% FBS 溶液中的活體組織放于一塊 60 mm 組織培養皿上，并用無菌手術刀將其切割成片，1 mm 大小。
2.另取最少三塊 60 mm 組織培養皿，用無菌手術刀尖在皿底劃上幾條水平線和垂直線。滴幾滴 DMEM 完全培養基/20% FBS 溶液至活體組織片上。在每個 60 mm 組織培養皿上用無菌 Pasteur 移液管放上 5 或 6 片活體組織。將組織放在水平線和垂直線的交叉點上。
3.孵化培養皿，不要加任何其他組織培養基，15~30 min，使組織片黏附在皿上。加 5 mlDMEM 完全培養基/20% FBS 溶液至每塊培養皿中，孵化培養基。
4.每 3~4d 更換一次培養基，但不要擾亂組織片。使用倒置顯微鏡觀察培養基中細胞的生長狀況（得花上 1 周至 1 月才能觀察到生長較好的細胞）。
5.當培養皿中的組織片周圍能看到大片的成纖維細胞時，用 1X 胰島素/EDTA/15% FBS 處理細胞，進行傳代（附錄 31)，注意當活體組織能夠繼續在培養基中生長時不要將它們取出來。將細胞轉移至盛有 DMEM 完全培養基/15%FBS 的 25 cm2 無菌組織培養瓶內。
6.當第一代細胞長滿后，再次用胰蛋白酶處理（附錄幻）。次代培養按1：3 分裝至 DMEM 完全培養基/15% FBS 溶液中。為 FA 患者進行 DEB 試驗時，至少有兩個第二代培養基中長滿細胞。
7.用 5 ml DMEM 完全培養基/15% FBS 溶液將細胞接種在 25 cm2 培養瓶中，使每個培養瓶中細胞的密度達到 3X105 個細胞（為本次檢驗準備兩個處理的和未處理的對照培養瓶）。孵化 24 h。
8.將 DEB 按以前所描述的那樣稀釋（基本方案，第 2~3 步），再增加第 4 管，分裝 PBS 4.5 ml。成纖維細胞培養還要增加最后一步稀釋，即從第 3 管中取出 0.5 ml(500ul 加入第 4 管中。
9.從第 4 管取出 254 加入到 10ml 新鮮的 DMEM 完全培養基/15% FBS 溶液中。
10.培養細胞直至細胞接近長滿（約 72 h)。
11.胰酶消化細胞（附錄 31) 按 1:2 或 1:3 傳代到新鮮的完全 DMEM/15%FBS 培養基。該培養基不含 DEB 用于收集充足的有絲分裂細胞來進行細胞遺傳研究。重新加入限制性培養基，該培養基含有鮮好、稀釋的 DEB。
12.于第一個有絲分裂時段收集培養的細胞（傳代 24~48 h; 這時細胞處于有絲分裂中期附近），在收集細胞前 3 h，加入 1ml 濃度為 1ug/ml 的秋水仙胺到 DEB 處理的細胞中，同時用未用 DEB 處理的細胞作對照（于 5 ml 培養基）。
13.用胰酶消化細胞，將培養瓶內的液體轉移至 15 ml 無菌的離心管，加蓋，150 g 離心 10min。
14.去掉大部分上清，使剩余上清內的沉淀重新懸浮，并慢慢加入 0.051mol/L 的 KCl 5 ml。在 37°C 水浴箱中孵化 lOmin。離心 lOmin。
15.像前面敘述的那樣將細胞固定在預備好的載玻片上（基本方案，第 9~12 步；在第 9 步，緩慢加人 3~5 ml 固定液)。
16.檢驗 100 個未處理和 DEB 處理后吉姆薩染色的中期分裂相細胞，找斷裂染色體，方法如前所述（基本方案，第 13 步，支持方案 2)。根據在 FA 患者成纖維細胞中為基線和 DEB 誘導的染色體斷裂所建立的評估來解釋結果。
備選方案 2 范可尼貧血二氧橋丁烷產前診斷試驗
FA 可以在妊娠時診斷，但有一定風險，在懷孕 9~12 周時通過培養絨毛絨膜取樣 (chorionic villus sampling,CVS) 獲得滋養層細胞或者在 15~17 周時羊膜穿刺獲得羊水細胞進行研究。FA 也可以用胎兒血液進行產前診斷，方法與以前的外周血培養相同。
研究 CVS 或羊膜穿刺獲得的胎兒細胞
1.在 25 cm2 的培養瓶內配置胎兒細胞培養基（單元 8.1 和單元 8.2)。
2.當培養瓶內有幾個大的、生長迅速的克隆時，不要讓克隆過度的生長，用胰酶消化細胞，按 1:2 或 1:3 進行首次傳代培養（附錄 31)。孵化 24 h。
3.用自有 0.01 ug/ml DEB 的新鮮生長培養基置換生長培養基（從兩個不同的首次傳代培養基中）至最少兩個培養瓶中。可能的話，用含0.1ug/ml DEB 的培養基置換首次傳代的培養基至另外兩個培養瓶中，稀釋與以前相同（備選方案丨，第 8~9 步)。
剩余培養瓶中的液體作為染色體斷裂研究基線的未處理對照。
4.孵化培養基，收獲并固定細胞，如之前敘述的那樣準備中期染色體涂片（備選方案 1，從第 10 步開始)。
5.每組共檢測 100 個中期分裂相（基線組，DEB 處理組；每組分別從兩個首次傳代培養瓶中各取 50 個中期分裂相）。根據針對通過 CVS 或羊膜穿刺獲得的 FA 胎兒細胞所制定的基線和 DEB 誘導的染色體斷裂所建立起來的評估來解釋結果。