1、硬件操作
熒光分光光度計在使用時，需要注意開機次序，以保護設備之間不受影響。熒光光譜儀開機順序一般為先開氙燈，然后開儀器主機，Z后開跟儀器連接的計算機。如此操作的原因在于穩態氙燈是高壓點亮，為了避免瞬問脈沖電流對周圍設備造成影響，需要先開氙燈，等電流穩定后再打開周邊的電腦等設備。關機順序則相反。
2、軟件操作
熒光定量分析多采用工作曲線法，即以已知量的標準物質，按試樣相同方法處理后，配成一系列標準溶液，測定其相對熒光強度和空白溶液的相對熒光強度；扣除空白值后，以熒光強度為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，繪制工作曲線；然后將處理后的試樣配成一定濃度的溶液，在同一條件下測定其相對熒光強度，扣除空白值后，從工作曲線上求出熒光物質的含量。
在用熒光分析法測定某些會引起熒光改變的微量物質時，常采用差示熒光法，可使熒光強度的讀數差距拉大，使熒光強度的降低加大，從而提高方法的靈敏度和準確度。
1、開機
（1）開啟計算機
（2）開啟儀器主機電源按下儀器主機左側面板下方的黑色按鈕（POWER）同時，觀察主機正面面板右側的Xe LAMP 和RUN指示燈依次亮起來，都顯示綠色為正常。
（3）雙擊桌面圖標（FL SoluTIons 4.1 for F-7000），主機自行初始化，掃描界面自動進入
（4）初始化結束后，須預熱15-20分鐘，出現操作主界面（界面右下角出現Ready）
2、點擊掃描界面右側“Method”
在“General”選項中的“Measurement”選擇“wavelength scan”測量模式 在“Instrument”選項中設置儀器參數和掃描參數 選擇掃描模式“Scan Mode”：Emission/ExcitaTIon（發射光譜/激發光譜） 選擇數據模式“Data Mode”：Fluorescence （熒光測量） 設定波長掃描范圍
掃描熒光激發光譜（ExcitaTIon）：需設定激發光的起始/終止波長（EX Start/End WL）和熒光發射波長（EM WL）
掃描熒光發射光譜（Emission）：需設定發射光的起始/終止波長（EM Start/End WL）和熒光激發波長（EX WL）
其他選項可選擇默認值（也可根據具體實驗要求自行設定） 參數設置好后，點擊“確定”
3、設置文件存儲路徑（此步也可不進行參數設置，可以在按5中方法進行保存）
（1）點擊掃描界面右側“Sample”
（2）樣品名可自行命名
（3）選中“Auto File”，可以自動保存原始文件和TXT格式文本文檔數據
（4）參數設置好后，點擊“OK”
4、掃描測試
（1）打開蓋子，放入待測樣品后，蓋上蓋子（請勿用力）
（2）點擊掃描界面右側“Measure”，窗口在線出現掃描譜圖
5、數據處理與保存
（1）選中自動彈出的數據窗口
（2）右鍵--“Trace”，進行讀數并尋峰等操作
（3）“File”--“Save as”對數據進行保存
6、關機順序：
（1）關閉運行軟件FL SoluTIon 2.1 for F-7000
（2）選中“Close the lamp，then close the monitor windows？”點擊“Yes”窗口自動關閉同時，觀察主機正面面板右側的Xe LAMP指示燈暗下來，而RUN指示燈仍顯示綠色
（3）約十分鐘后，關閉儀器主機電源，即按下儀器主機左側面板下方的黑色按鈕（POWER）（目的是僅讓風扇工作，使Xe燈室散熱）
（4）從樣品池中取出所有比色皿，清洗干凈以便下一次使用
（5）關閉計算機
1、在實驗開始前，應提前打開儀器預熱，并配制好所需的溶液，對于已經配制好的溶液，在不用時放在4℃冰箱中保存，放置時間超過一星期的溶液要重新配制。
2、在測試樣品時，注意熒光強度范圍的設定不要太高，以免測得的熒光強度超過儀器的測定上限。
3、實驗所用的樣品池是四面透光的石英池，拿取的時候用手指掐住池體的上角部，不能接觸到四個面，清洗樣品池后應用擦鏡紙對其四個面進行輕輕擦拭。
4、實驗結束后，要及時的清理臺面，處理廢液，清洗和放置好樣品池，將下次要用的溶液放回冰箱，并且按規定登記實驗記錄，養成良好的實驗習慣。