熒光分光光度計是測樣品發射出的熒光的,而紫外分光光度計測的是樣品的吸收。熒光分光光度計用一束光(激發光)穿過樣品的溶液,然后檢測樣品發射出來的熒光。熒光波長總是比激發波長更長。為了防止激發光對檢測的干擾,檢測器與光源是垂直的。紫外分光光度計將光源分成兩束,一束通過樣品溶液,另一束通過空白對比,然后比較這兩束光的強弱,以便確定有多少光線被樣品吸收了。