熒光原位雜交技術的定義、原理、背景及優勢

　　熒光原位雜交方法是一種物理圖譜繪制方法，使用熒光素標記探針，以檢測探針和分裂中期的染色體或分裂間期的染色質的雜交。熒光原位雜交技術是一種重要的非放射性原位雜交技術。

　　它的基本原理是：如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的，二者經變性-退火-復性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素、地高辛，可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學反應，經熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。

　　熒光原位雜交技術問世于70年代后期，其曾多用于染色體異常的研究，近年來隨著FISH所應用的探針鐘類的不斷增多，特別是全Cosmid探針及染色體原位抑制雜交技術的出現，使FISH技術不僅在細胞遺傳學方面，而且還廣泛應用于腫瘤學研究，如基因診斷基因定位等 。

　　原有的放射性同位素原位雜交技術存在著較多缺點，諸如每次檢驗均需重新標記探針，已標記的探針表現出明顯的不穩定性，需要較長的曝光時間和對環境的污染等。

　　此外，由于放射性銀粒和染色體聚集的不同平面，可能引起計數上的誤差等。與之比FISH則具有：

　　①操作操作簡便，探針標記后穩定，一次標記后可使用二年；

　　②方法敏感，能迅速得到結果；

　　③在同一標本上，可同時檢測幾種不同探針；

　　④不僅可用于分裂期細胞染色體數量或結構變化的研究，而且還可用于間期細胞的染色體數量及基因改變的研究等特點。