熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) ： 熒光顯微鏡是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體， 使之發出熒光， 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。多用于：（1）研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。（2）有一些物質本身雖不能發熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經紫外線照射亦可發熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究。
| 實驗方法原理 | 1. 細胞凋亡是指為維持內環境穩定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡不是一件被動的過程，而是主動過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用，它并不是病理條件下，自體損傷的一種現象，而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。
2. 細胞凋亡有別于細胞壞死，它有一系列的細胞形態學和生物化學的改變，包括出現染色體濃縮、DNA降解、凋亡小體的形成等。在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸（phosphotidylserine,PS）位于細胞膜內側，但在凋亡細胞中，PS從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中，Annexin-V（膜聯蛋白-V）是一種分子量為35-36KD的Ca2+的依賴性磷脂結合蛋白，能與PS高親和力結合。因此將Annexin-V進行熒光素（如FITC 、PE）或生物素（biotin）標記，以標記了的膜聯蛋白-V作為探針，利用熒光顯微鏡檢測細胞凋亡的發生。 |
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| 實驗材料 | 腫瘤細胞 |
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| 試劑、試劑盒 | 福爾馬林PBS溴乙錠羅丹明水 |
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| 儀器、耗材 | 載玻片蓋玻片熒光探針紫外分光光度計 |
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| 實驗步驟 | 1. 收集約106細胞，用冷PBS洗2次。
2. 4%福爾馬林4℃固定10min左右后涂片，晾干。
3. 以5-10μg/mL hocchst 33258染色5-10min，水沖凈，晾干后觀察，以紫外光（340nm）激發hocchest。 |
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| 注意事項 | 1. 整個實驗操作過程要盡量輕柔，切勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作。
2. 反應完畢后盡快檢測，因為細胞凋亡是一個動態的過程，反應一小時后熒光強度就開始衰變。 |
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| 其他 | 熒光顯微鏡與其他顯微鏡的區別：
1、光源：普通顯微鏡采用的是普通的自然光，而它采用的是波長短，分辨率高的紫外線。
2、照明方式：熒光顯微鏡采用的是較為特殊的落射式，將光源直接投射在樣品上。
3、濾光片：為了保護觀察者的眼睛，熒光顯微鏡在目鏡和物鏡之間安裝了可以過濾掉傷眼的紫外線的濾光片。
使用熒光顯微鏡時：
1、要嚴格遵照說明書的指示操作，不能跨步或隨意調換更改順序。
2、觀察時要在黑暗的空間中進行。等到眼睛適應黑暗環境后，再進行觀察。
3、為了避免紫外線對眼睛的傷害，調節光源時需要帶上防護眼鏡。
4、由于光源是有一定使用壽命的，所以一切步驟都需要節約時間，從而保護光源，讓它的使用壽命最長化。
來源于《153Sm-EDTMP誘發骨肉瘤細胞凋亡的熒光顯微鏡形態和增生抑制研究》，核技術，朱壽彭1999,22（5）。
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