薄層色譜鑒別法
薄層色譜法鑒別原理為同一種藥物在同樣條件下的薄層色行為相同。一般采用對照品(或標準品)比較法,將供試品和對照品(或標準品)按藥典規定,用同種溶劑配成同樣濃度的溶液。在同一層板上點樣、展開、顯色,要求供試品斑點應與對照品(或標準品)斑點的位置(Rf)和顏色一致。薄層色譜法簡單易行,適用于鑒別藥物及其制劑的真偽;其應用范圍日益擴大,特別是高效薄層色譜應用于中藥鑒別方面。
在薄層色譜鑒別時需注意,點樣基線距底邊10～15mm,高效板一般基線離底邊8～10mm。點樣時小心,不要損傷薄層表面;點樣的直徑一般不大于3mm,高效板一般不大于2mm;點間距離可視斑點擴散情況調整,并保證相鄰斑點互不干擾,一般不少于8mm,高效板供試品間隔不少于5mm。展開前如果需要溶劑蒸氣預平衡,可在展開缸中加入適量的展開劑,密閉保持15～30min。溶劑蒸氣預平衡后,迅速將點好供試品的薄層板放入展開缸中,進入展開劑的深度為距原點5mm為宜,展開劑不得沒過原點,密閉,靜置。除另有規定外,一般上行展開8～15cm,高效薄層板上行展開5～8cm。溶劑前沿達到規定的展距,取出薄層板,晾干,待檢測。
供試品顯色的方法:①含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視,也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色,或加熱顯色,在日光下檢視。②有熒光的物質或遇某些試劑可激發熒光的物質可在365nm紫外光燈下觀察熒光色譜。③對于可見光下無色、但在紫外光下有吸收的成分可川熒光薄層板(如硅膠GF254板)檢測,硅膠GF254板是在硅膠中摻入了少量熒光物質面制成的板,在254nm紫外燈下,整個薄層板呈黃綠色熒光,被測物質由于熒光猝火作用而呈現暗斑。
如葡萄糖酸鈣鑒別項下要求“取本品50mg,加水5mL,溫水浴溶解,濾過,取濾液作為供試品溶液。另取葡萄糖酸鈣對照品,同法制成每1mL中含10mg的溶液,作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗,吸取上述兩種溶液各5μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以乙醇-水-濃氨溶液-乙酸乙酯(50:30:10:10)為展開劑,展開,晾干,置110℃加熱20min后,放冷,噴以鉬酸銨-硫酸鈰試液(取鉬酸銨2.5g,加1mol/L硫酸溶液50mL使溶解,再加硫酸鈰1.0g,加1mol/L硫酸溶解并稀釋至100mL,搖勻),再在110℃加熱10min后,取出放冷,10min后檢視。供試品溶液所顯主斑點的位置和顏色應與對照品溶液的主斑點相同”。