一、材料和方法
1. 材料及滅菌
將田間生長旺盛、具有有利變異性狀的菊苣采回來后，切去葉片。將葉柄放到磨口瓶中，用自來水沖洗4次后，用0.05%安利洗滌液洗滌30min，洗至無泡沫時置于超凈工作臺上。
用75%乙醇滅菌20s后迅速用無菌水洗滌3次，接著用0.1%HgCl2溶液振蕩滅菌1min，再用0.05%HgCl2溶液振蕩滅菌12min，接著用無菌水振蕩洗滌6次。即獲得無菌材料。
2. 培養條件
培養基以MS、I/2 MS和1/3 MS為基本培養基，附加不同濃度的細胞分裂素BA和生長素IAA、NAA、2，4-D丁酯。以MS為基本培養基時，加蔗糖30g/L；以l/2 MS為基本培養基時，加蔗糖15g/L；以1/3 MS為基本培養基時，加蔗糖10g/L。培養基胨力強度為180g/cm2，pH值5.8~6.0。培養溫度18~26℃，光照l0~12h/d。光照強度2000~3000lx。
3. 試驗方法
（1）愈傷組織誘導培養 將無菌葉柄切成0.2cm左右的塊接種到以MS為基本培養基，附加不同濃度的BA、NAA、IAA和2，4-D丁酯的培養基上，進行愈傷組織的誘導，60d后觀察統計。
（2）愈傷組織及不定芽的分化培養 將在誘導菊苣葉柄形成愈傷組織的理想培養基上誘導出的葉柄顆粒狀愈傷組織接種到附加不同濃度BA、NAA的l/2 MS+AgN03 20.5mg/L和l/3 MS+AgN03 20.5mg/L培養基上，進行愈傷組織的分化培養。
（3）不定芽生根培養 將上述分化培養的不定芽從基部剪下，接種到以1/2 MS和1/3 MS為基本培養基，附加不同濃度IAA、NAA和IBA的生根培養基上進行生根培養。培養到l0d時有的培養基上可見形成根原基。培養30d時觀察統計。
（4）試管苗移栽 將生根苗培養瓶瓶塞打開，置于光照約5000Lx、溫度20℃左右的條件下煉苗4d后，用鑷子取出。洗去基部培養基，移栽到上面鋪著5～6cm厚不同基質的溫室苗床上。20d后觀察統計。
二、結果與分析
1. 愈傷組織的誘導
在不用激素或BA與IAA配合使用條件下，不能誘導葉柄塊形成愈傷組織；而濃度分別為0.4mg/L、0.8mg/L、1.2mg/L、1.6mg/L、2.0mg/L的BA與濃度為0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L和2.5mg/L的NAA、2,4-D丁酯配合使用時，幾乎所有的葉柄塊都能夠誘導形成愈傷組織。
但誘導的愈傷組織生長速度及外部形態卻差異較大。在BA濃度為0.4mg/L、2.4-D丁酯濃度為1.6mg/L的培養基上，不僅愈傷組織的誘導率為98%，愈傷組織的生長速度快，而且所誘導的愈傷組織外觀呈淡綠色的顆粒狀，愈傷組織顆粒問連接松散、質地疏松。一般認為，這種愈傷組織為具有分化能力的愈傷組織。
除MS+BA 0.4mg/L+2，4-D丁酯1.6mg/L這一培養基外，在其它培養基上誘導的愈傷組織從形態、結構、顏色和質地等性狀上看.均為沒有分化能力的愈傷組織或分化能力差的愈傷組織。
把在MS+BA 0.4mg/L+2,4-D丁酯1.6mg/L培養基上誘導的淺綠色顆粒狀愈傷組織.在同一培養基上連續繼代培養9代，形成的愈傷組織仍為具有分化能力的愈傷組織。這說明MS+BA0.4mg/L+2,4-D丁酯1.6mg/L是誘導菊苣葉柄形成具有分化能力愈傷組織的理想培養基。
2. 愈傷組織與不定芽的分化培養
培養結果表明：培養10d左右，有的愈傷組織顆粒形成了綠色的芽點；培養到40d時進行統計，只有部分培養基能誘導顆粒狀愈傷組織分化。其中在l/2Ms+AgN03 20.5mg/L+BA 0.3mg/L+NAA 0.1mg/L培養基上不僅分化率達98.0%。
而且分化的不定芽為高1cm左右、長勢較旺盛的叢生狀。把分化形成的叢生芽從基部切下.接種到相同堵養基上進行分化不定芽分化繼代培養45d后1個不定芽又會分化形成一叢生長較為旺盛的叢生不定芽。40d時平均分化增殖率為7.2倍。
經過連續11次的繼代培養，其分化率和長勢基本保持不變。由此說明，該研究中菊苣葉柄愈傷組織和不定芽分化的理想培養基為l/2Ms+AgN03 20.5mg/L+BA 0.3mg/L+NAA 0.1mg/L。
3. 生根培養
在附加NAA和IBA的生根培養基中，難以誘導生根；在IAA濃度達到和超過0.8mg/L時，也難以誘導生根；而在IAA濃度為0.2~0.4mg/L的生根培養基上，不僅生根率達90%以上，而且單株生根數也達到5.2條以上。并且l/3 MS培養基上的生根效果好于1/2 MS。觀察還表明，在上述1/3MS生根培養基上，不僅生根率高、根數多，而且試管苗長勢旺盛。培養至30d時，可以長成株高為3cm左右、具有6條以上根的試管苗。表明1/3 MS+IAA 0.2~0.4mg/L是變異菊苣不定芽生根的理想培養基。
4. 移栽
以爐灰渣和河沙為移栽基質成活率較高，且長勢較好。觀察還表明，以爐灰渣為移栽基質時，不僅成活率最高，而且成活苗長勢也最好。這說明爐灰渣是菊苣試管苗移栽的理想基質。把在溫室中移栽成活試管苗移植到田間，通過3次小批量試驗證明，具有優良變異性狀的菊苣試管苗長勢旺盛而整齊，優良的變異性狀保持不變。單位面積可食嫩葉產量比實生苗提高13%~18%。
三、討論
迄今為止，雖然已有菊科萵苣屬菊苣組織培養的報道，但未見栽培菊苣變異植株組織培養及無性系建立的報道。本研究利用變異菊苣的葉柄為外植體進行了愈傷組織誘導與分化、不定芽分化與生根、試管苗移栽與移植的研究。葉柄愈傷組織能以較高分化率分化出不定芽.證明菊苣的葉柄在離體條件下仍具有較強的生長分化力.這不僅證明栽培菊苣非分生組織細胞也具有全能性；而且還說明，通過組織培養的方法，能使大批栽培中偶爾發生的有利變異植株得到保存，為優良變異品系保存和利用提供了可能。對芽進行分化培養，40d時的分化率為7.2，按照這個增殖速度，年增殖率為7.29。這說明，通過這種方法進行快速繁殖，一年內可增殖出大量的具有有利變異性狀菊苣試管苗。這為優良植株的工廠化育苗，滿足生產上對優良菊苣種苗的需求提供了可能。在生根培養時，使用IAA效果較好。這是因為IAA為植物天然生長素在光照條件下分解。把待生根的不定苗接種到以IAA為生長素的生根培養基中，7d左右誘導形成根原基。此時IAA因光照大部分分解，使其含量降低到不至于抑制根的伸長生長的濃度。在移栽過程中，爐灰渣為理想的移栽基質，這是因為爐灰渣為黑色物質。具有很好吸光作用，有利于增溫，為幼苗生長提供較高溫度。并且爐灰渣是經高溫煉燒后所得，所帶雜菌少。加之其來源較廣，四季皆可獲得。因此，爐灰渣是變異菊苣試管苗移栽的理想基質。