菌種保藏實驗_沙土保藏法

微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于最不活躍或相對靜止的狀態，才能在一定的時間內使其不發生變異而又保持生活能力。

選用優良菌株，根據生理生化特征干燥菌種使其處于休眠狀態或者代謝處于最低的狀態，生長繁殖受抑制從而降低變異率。

此法多用于能產生孢子的微生物如霉菌、放線菌，因此在抗生素工業生產中應用最廣，效果亦好，可保存2年左右，但應用于營養細胞效果不佳。

細菌酵母菌放線菌霉菌

稀鹽酸河沙自來水瘦黃土紅土肉湯培養基

篩子沙土管安瓿管試管真空干燥器滅菌鍋冰箱

一、取河沙加入10%稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘，以去除其中的有機質。

二、倒去酸水，用自來水沖洗至中性。

三、烘干，用40目篩子過篩，以去掉粗顆粒，備用。

四、另取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土，加自來水浸泡洗滌數次，直至中性。

五、烘干，碾碎，通過100目篩子過篩，以去除粗顆粒。

六、按一份黃土、三份沙的比例（或根據需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，裝入10×100 mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，進行滅菌，烘干。

七、抽樣進行無菌檢查，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養基中，37℃培養48小時，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌，再作無菌試驗，直至證明無菌，方可備用。

八、選擇培養成熟的（一般指孢子層生長豐滿的，營養細胞用此法效果不好）優良菌種，以無菌水洗下，制成孢子懸液。

九、于每支沙土管中加入約0．5ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液，以接種針拌勻。

十、放入真空干燥器內，用真空泵抽干水分，抽干時間越短越好，務使在12小時內抽干。

十一、每10支抽取一支，用接種環取出少數沙粒，接種于斜面培養基上，進行培養，觀察生長情況和有無雜菌生長，如出現雜菌或菌落數很少或根本不長，則說明制作的沙土管有問題，尚須進一步抽樣檢查。

十二、若經檢查沒有問題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。

十三、需要使用菌種，復活培養時，取沙土少許移入液體培養基內，置溫箱中培養。