蛋白質一級結構的測定方法（二）

   2)末端分析　其方法較多，這里我們只介紹較常用的幾種。

　　(1)N-末端測定

　　A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要貢獻之一。
　　DNP-氨基酸用有機溶劑抽提后，通過層析位置可鑒定它是何種氨基酸。Sanger用此方法測定了胰島素的N末端分別為甘氨酸及苯丙氨酸。

　　B.氰酸鹽法：1963年Stank及Smyth介紹了一種測定N末端的新方法，步驟如下：

　　由于乙內酰脲氨基酸不帶電荷，因此可用離子交換層析法將它與游離氨基酸分開，分離所得的乙內酰脲氨基酸再被鹽酸水解，重新生成游離的氨基酸，鑒別此氨基酸即可了解N-末端是何種氨基酸。

　　C.二甲基氨基萘磺酰氯法：1956年Hartley等報告了一種測定N-末端的靈敏方法，采用1-二甲基氨基萘-5-磺酰氯，簡稱丹磺酰氯。它與游離氨基末端作用，方法類似于Sanger的DNFB法，產物是磺酰胺衍生物。

　　丹磺酰鏈酸具有強烈的黃色熒光。此法優點為靈敏性較高(比FDNB法提高100倍，樣品量小于1毫微克分子)及丹磺酰氨基酸穩定性較高(對酸水解穩定性較DNP氨基酸高)，可用紙電泳或聚酰胺薄膜層析鑒定。