蛋白質含量的測定實驗——OLIN酚法

FOLIN 酚法所用的試劑有兩部分組成。試劑甲可與蛋白質中的肽鍵起顯色反應, 試劑乙在堿性條件下極不穩定, 易被酚類化合物還原成藍色(蛋白質中的酚基將磷鉬酸-磷鎢酸還原成藍色復合物)。在一定條件下, 藍色強度與蛋白質的量成正比, 范圍約在25～250 μg/ ml 蛋白質濃度。

蛋白質

碳酸鈉氫氧化鈉硫酸銅酒石酸鈉鎢酸鈉鉬酸鈉蒸餾水磷酸濃鹽酸硫酸鋰液體溴酚酞

722S 型分光光度計電子天平離心機容量瓶試管吸管

1.  樣品的制備
用臺秤稱取小白菜或其他植物10 g , 用剪刀剪碎后, 用碾缽碾成勻漿, 加水30 ml , 繼續碾10 min , 倒入離心管中, 另加5 ml水將剩余物洗進離心管, 平衡后于1000 r/ min 離心15 min , 取上清10 ml 定容到100 ml , 待測。

2.  標準曲線的制作與樣品測定

按下表操作，A . FOLIN 酚法    B . 考馬斯亮藍法

(標: 標準蛋白質溶液, F : FOLIN 試劑: K: 考馬斯亮藍 G250 試劑。自己制備的蛋白質溶液測定含量時注意稀釋度)

1.  蛋白質樣品和呈色劑都不應有沉淀, 有沉淀應過濾除去。

2.  染料與蛋白質結合后, 形成的藍色復合物易輕度沾附試管壁或比色皿, 每次使用不能用有著色的比色皿。使用完后應立即清洗干靜。