蛋白質的抽提實驗

實驗材料 轉型菌株pQG11 M15 [pREP] 單一菌落

試劑、試劑盒 LB amp kan液體培養基IPTGNa3PO4·12H2ONaClEDTATriton X-100液氮

儀器、耗材 恒溫震蕩培養箱高速冷凍離心機離心管冰筒

實驗步驟

一、儀器用具

恒溫震蕩培養箱37℃；高速冷凍離心機及離心管 （使用20,000 rpm離心陀）使用高速離心機要注意： 離心機及離心陀的溫度要預冷完全，相對位置的兩只離心管要平衡好，離心陀轉速絕對不能超過最高速限；液態氮及冰筒；37℃溫水浴。

二、藥品試劑

轉型菌株pQG11/M15 [pREP] 單一菌落；LB/amp/kan 及IPTG （1 M stock）；Lysis buffer （50 mM Na3PO4·12H2O， pH7.0； 0.1 M NaCl；0.1 mM EDTA； 0.2%Triton X-100）使用前添加成10 mM β-mercaptoethanol，25 μg/mL PMSF，40 μg/mL lysozyme.Buffer A-0 （50 mM Na3PO4， pH7.0） 使用前每1 L 添加70 μL β-mercaptoethanol 成為10 mM 最終濃度。Buffer A-150: Buffer A-0 再加有0.15 M NaCl；硫酸銨（要烘干并以研砵磨碎）。

三、方法步驟

1.  挑取培養皿上單一菌落，培養在15 mL 的LB/amp/kan 液體培養基中，以120 rpm 轉速震蕩，在37℃下培養過夜。

2.  取上述菌液6 mL加入300 mL新鮮LB/amp/kan培養基中，以120 rpm 37℃培養至A600 = 0.6 后，加入IPTG成為1 mM濃度，繼續以120 rpm在37℃震蕩培養4 h。