蛋白質的濃縮技術

實驗概要

蛋白質濃縮技術是免疫學中常用的手段，現介紹幾種常用的濃縮技術。

實驗步驟

1. 透析袋濃縮法

利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種。

將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替），結扎，把高分子（6000－12000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可將吸水劑配成30％－40％濃度的溶液，將裝有蛋白液的透析袋放入即可。吸水劑用過后，可放入溫箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。

2. 冷凍干燥濃縮法

這是濃縮蛋白質的一種較好的辦法，它既使蛋白質不易變性，又保持蛋白質中固有的成分。它是在冰凍狀態下直接升華去除水分。

具體做法是將蛋白液在低溫下冰凍，然后移置干燥器內（干燥器內裝有干燥劑，如NaOH、CaCl₂和硅膠等）。密閉，迅速抽空，并維持在抽空狀態。數小時后即可獲得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白質保存方便，應用時可配成任意濃度使用。也可采用凍干機進行冷凍干燥。

3. 吹干濃縮法

將蛋白溶液裝入透析袋內，放在電風扇下吹。

此法簡單，但速度慢，且溫度不能過高，最好不要超過15℃。

4. 超濾膜濃縮法

此法是利用微孔纖維素膜通過高壓將水分濾出，而蛋白質存留于膜上達到濃縮目的。

有兩種方法進行濃縮：一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過濾器內，在不斷攪拌之下過濾；另一種是將蛋白液裝入透析袋內置于真空干燥器的通風口上，負壓抽氣，而使袋內液體滲出。

5. 凝膠濃縮法

選用孔徑較小的凝膠，如SephadexG₂₅或G₅₀，將凝膠直接加入蛋白溶液中。根據干膠的吸水量和蛋白液需濃縮的倍數而稱取所需的干膠量。放入冰箱內，凝膠粒子吸水后，通過離心除去。

6. 濃縮膠濃縮法

濃縮膠是一種高分子網狀結構的有機聚合物，具有很強的吸水性能。每克干膠可吸水120ml～150ml。它能吸收低分子量的物質，如水、葡萄糖、蔗糖、無機鹽等，適宜濃縮10 000分子量以上的生物大分子物質。濃縮后，蛋白質的回收率可達80％～90％。比濃縮膠應用方便，直接加入被濃縮的溶液中即可。必須注意，濃縮溶液的pH值應大于被濃縮物質的等電點，否則在濃縮膠表面產生陽離子交換，影響濃縮物質的回收率。