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  • 發布時間:2019-03-31 22:18 原文鏈接: 蛋白酶的測定實驗——偶氮酪蛋白測定法

    實驗方法原理酪蛋白的敏感性鑒定可以通過這個實驗得到很大程度的改善。含氮的基團與酪蛋白的共價鍵被蛋白水解時切斷,用 TCA 上清液測定它們的顏色變化。
    實驗材料

    蛋白酶溶液

    試劑、試劑盒

    磷酸鉀偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白)三氯乙酸

    儀器、耗材

    分光光度計

    實驗步驟


    0.5 ml 偶氮酪蛋白溶液


    0.2 ml 蛋白酶溶液


    25℃ 時培養 30 min 后,加 0.2 ml 10% 三氯乙酸停止反應,離心 5 min。


    于 340 nm 處測上清液的吸收值,1U 是指 1 h 內,能使吸收值變化 1 的酶量。

    注意事項
    其他


    試劑:


    0.1 mol/L 磷酸鉀,pH 8.0


    0.2% 偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白)溶于 0.1 mol/L 磷酸鉀溶液,pH 8.0


    10% 三氯乙酸(TCA,質量濃度)


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