1、進行目的基因的克隆:根據基因序列互補原則,設計合適的引物序列,以cDNA為模板,利用PCR技術擴增不同的目的DNA片段。
2、在載體中進行重組:通過限制內切酶將兩個DNA片段進行酶切并回收,然后通過連接酶將兩個具有相同末端酶切位點的基因片段進行體外連接,并克隆到高表達質粒載體中,構建重組質粒。
3、將重組表達載體轉染宿主細胞并利用選擇標志進行篩選及測序。
4、融合基因的誘導表達及表達蛋白的純化 。