融合蛋白化學降解實驗

1 mg ml 融合蛋白

50 mg ml CNBr 70%（V V）甲酸 1 × SDS 樣品緩沖液

1. 進行預試驗以確定最短溫育反應時間。凍干兩小份各 50 μl 的融合蛋白溶液，將其中一份重懸于 50 μl 50 mg/ml CNBr / 70% 甲酸中，另一份重懸于 50 μl 不含 CNBr 的 70% 甲酸中，室溫下反應。

2. 在 0、8、24 及 48 h 的時刻，各取 5 μl 并凍干。

3. 往所有凍干樣本加 20 μl 1 × SDS 樣品緩沖液，煮沸 10 min，加樣于 SDS-聚丙烯酰胺凝膠。

4. 分析凝膠電泳結果以確定完全裂解蛋白質所需的最短溫育反應時間。

1. CNBr 有劇毒，須在通風櫥中操作，使用及棄置均應小心謹慎。

2. 當蛋白質對 CNBr 的裂解有抗性時或當待裂解的為不溶性融合蛋白時，可在反應中加入鹽酸胍至終濃度為 6 mol/L。