融合蛋白化學降解實驗2

融合蛋白

Tris·ClNaCl鹽酸胍羥胺裂解緩沖液SDS

離心機水浴鍋培養箱

1.  進行預試驗以確定最短保溫反應時間。將50 μl 1 mg/ml  融合蛋白與50 μl 2×羥胺裂解緩沖液混合在1.5 ml 微量離心管中，45℃溫育反應。

2.  在0、2、4、8、16和24 h 的反應時刻，分別取10 μl 反應混合物與10 μl 2×SDS樣品緩沖液混勻，干冰中凍存直至所有時刻的樣本收集完畢。

3.  在沸水浴中將所有樣品加熱10 min，加樣于SDS-聚丙烯酰胺凝膠，電泳分析其裂解程度。

4.  確定得到最大程度裂解所需的最短溫育反應時間。