融合蛋白的酶解實驗

實驗材料 融合蛋白

試劑、試劑盒 SDS

儀器、耗材 水浴鍋培養箱離心機

實驗步驟

1.  準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間：

（1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應

（2）反應2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（模擬消化），室溫下反應。

2.  分別在2、4、8和24 h取出5 μl 反應液，加2×SDS樣品緩沖液5 μl，-20℃下凍存。

3.  在24 h 時，將5 μl 反應2（模擬消化）液與5 μl 2×SDS樣品緩沖液混合。

4.  將5 μl 原始融合蛋白溶液與5 μl 2×SDS樣品緩沖液混合。

5.  將所有樣品于沸水浴中加熱10 min，加樣到SDS-聚丙烯酰胺凝膠上電泳，根據裂解程度確定適當的溫育時間。

6.  確定了適當的裂解條件后，將余下的融合蛋白樣本按比例擴大反應，僅留小量的未裂解融合蛋白作對照用。以SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳監測裂解程度。